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产物极性太大，怎么分离纯化？
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想从发酵液中分离纯化新物质，发酵液中有很多糖，产物极性极性很大,用了反相柱，c18纯水和甲醇梯度洗脱，纯水一上，哗啦一下就全下来了，现在不知道该用什么方法分离纯化了。想知道怎么除糖，然后使用什么方法纯化。

XM_1744205141981 编辑于 2025-04-09 21:32 关注问题 分享 举报
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普天同庆

可尝试以下方案： 1. 除糖预处理（降低背景干扰） （1）活性炭吸附法 原理：活性炭对糖类（尤其是单糖、二糖）吸附较弱，但对多数有机分子（尤其是芳香族、极性较小分子）吸附较强。操作：将发酵液调至pH 3-5，加入1-5% (w/v) 活性炭搅拌30分钟，过滤或离心。若目标物被吸附，可用乙醇/丙酮解吸。适合糖类分子量较小（如葡萄糖、蔗糖）且目标物可被解吸的情况。 （2）膜过滤/超滤 选择截留分子量（MWCO）：若糖为小分子（如葡萄糖，MW 180），目标物分子量较大（如>1 kDa），选3-10 kDa超滤膜。 （3）乙醇沉淀法 步骤：加入2-4倍体积冷乙醇（4℃），静置后离心（糖溶于乙醇，部分大分子或多糖沉淀）。 优化：可调整乙醇浓度或结合pH调节（如pH 7 vs. pH 2）选择性沉淀目标物。 2. 高极性产物的纯化策略 （1）亲水相互作用色谱（HILIC） 原理：与反相色谱互补，固定相为极性基团（如硅胶、氨基柱），流动相为高有机相（乙腈）→水梯度。 （2）离子交换色谱（IEX） 适用性：若目标物带电荷（-COOH, -NH₂）。 阴离子交换（AX）：pH>pI时用Q或DEAE柱（如HiTrap Q FF）。 阳离子交换（CX）：pH<pI时用SP柱。 洗脱：NaCl梯度（0→1 M）或pH梯度。 （3）凝胶过滤色谱（GFC） 选择：若目标物与糖分子量差异大（如Sephadex G-10除小分子糖，或Superdex 30分离1-10 kDa物质）。 （4）大孔吸附树脂 推荐树脂：Diaion HP-20（疏水）或XAD-16（极性吸附），糖穿透后，用乙醇/丙酮洗脱目标物。 总结就是：发酵液 → 离心/过滤（去除菌体） → 超滤（MWCO 3 kDa除小分子糖） → HILIC色谱（乙腈/水梯度） → 冷冻干燥（得纯品）。
可尝试以下方案：1. 除糖预处理（降低背景干扰）（1）活性炭吸附法原理：活性炭对糖类（尤其是单糖、二糖）吸附较弱，但对多数有机分子（尤其是芳香族、极性较小分子）吸附较强。操作：将发酵液调至pH 3-5，加入1-5% (w/v) 活性炭搅拌30分钟，过滤或离心。若目标物被吸附，可用乙醇/丙酮解吸。适合糖类分子量较小（如葡...显示全部
发表于 2025-04-13 13:50 添加评论 分享 举报
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