Fc结构域融合可以改善相对较小的生物分子（如肽，细胞因子和抗体片段）的治疗效果。Fc融合蛋白还可用于增强小双特异性抗体（bsAbs）的细胞毒性作用。然而，Fc融合蛋白的片段化是主要问题，其主要发生在血液的产生，储存和循环期间的铰链区周围。在这项研究中，我们首先研究了在存储过程中使用对表皮生长因子受体和CD3具有特异性的Fc融合bsAbs在铰链区周围断裂的机制。凝胶过滤分析产生的碎裂峰表明，污染的蛋白酶和溶解的活性氧均应被视为碎裂的原因。我们通过在上部铰链区中引入点突变来设计和构建变体，从而减少了溶解的活性氧引起的裂解，并缩短了铰链区以限制蛋白酶的进入。这些铰链修饰改善了抗断裂性，并且在体外不影响bsAb的生物学活性。我们证实了使用另一种Fc融合的bsAb进行铰链修饰的多功能性。我们的结果表明，对Fc融合蛋白的铰链修饰，特别是将点突变引入上铰链区，可以显着减少片段化，并且这些修饰可以用于改善其他重组Fc融合蛋白的片段化抗性。并缩短了铰链区以限制蛋白酶的进入。这些铰链修饰改善了抗断裂性，并且在体外不影响bsAb的生物学活性。我们证实了使用另一种Fc融合的bsAb进行铰链修饰的多功能性。我们的结果表明，对Fc融合蛋白的铰链修饰，特别是将点突变引入上铰链区，可以显着减少片段化，并且这些修饰可以用于改善其他重组Fc融合蛋白的片段化抗性。并缩短了铰链区以限制蛋白酶的进入。这些铰链修饰改善了抗断裂性，并且在体外不影响bsAb的生物学活性。我们证实了使用另一种Fc融合的bsAb进行铰链修饰的多功能性。我们的结果表明，对Fc融合蛋白的铰链修饰，特别是将点突变引入上铰链区，可以显着减少片段化，并且这些修饰可以用于改善其他重组Fc融合蛋白的片段化抗性。



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