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ssODN介导的CRISPR-Cas敲入，用于受精卵中的大基因组区域。
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2016-Jan-20 , DOI: 10.1038/ncomms10431
Kazuto Yoshimi , Yayoi Kunihiro , Takehito Kaneko , Hitoshi Nagahora , Birger Voigt , Tomoji Mashimo
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2016-Jan-20 , DOI: 10.1038/ncomms10431
Kazuto Yoshimi , Yayoi Kunihiro , Takehito Kaneko , Hitoshi Nagahora , Birger Voigt , Tomoji Mashimo
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CRISPR-Cas系统是产生转基因动物的强大工具。然而，在受精卵中，通过同源重组的靶向敲入（KI）仍然很困难。在这里，我们通过将CRISPR-Cas与单链寡聚脱氧核苷酸（ssODNs）结合，显示了大鼠中有效的基因KI。首先，与向导RNA（gRNA）和Cas9信使RNA共同注射的1 kb ssODN在大鼠Thy1基因座处产生GFP-KI。然后，具有两个80 bp ssODN的两个gRNA通过ssODN介导的末端连接将5.5 kb CAG-GFP载体有效整合到Rosa26基因座中。该协议还实现了包含人SIRPA基因座的200 kb BAC的KI，同时敲除了大鼠Sirpa基因。最后，三个gRNA和两个ssODNs用6.2-kb的人CYP2D6基因取代了58-kb的大鼠Cyp2d簇。
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更新日期：2016-01-23
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