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Highly Sensitive Glycan Profiling of Hepatitis B Viral Particles and a Simple Method for Dane Particle Enrichment
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2018-08-03 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.analchem.8b01030 Takanori Wagatsuma 1, 2 , Atsushi Kuno 1 , Kiyohiko Angata 1 , Kazuto Tajiri 3 , Junko Takahashi 4 , Masaaki Korenaga 2 , Masashi Mizokami 2 , Hisashi Narimatsu 1
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2018-08-03 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.analchem.8b01030 Takanori Wagatsuma 1, 2 , Atsushi Kuno 1 , Kiyohiko Angata 1 , Kazuto Tajiri 3 , Junko Takahashi 4 , Masaaki Korenaga 2 , Masashi Mizokami 2 , Hisashi Narimatsu 1
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Hepatitis B virus (HBV) is a double-stranded DNA virus composed of three types of viral particles. The virions are called Dane particles and the others are noninfectious subviral particles (SVPs). In blood, SVPs are detected in abundance, about 1000–10000 fold higher than Dane particles. Dane particles are hazardous because of their strong infectivity, unlike SVPs. Dane particles are covered with an envelope of glycoprotein called HBV surface antigen (HBsAg). HBsAg glycosylation is involved in viral particle formation and secretion. In this study, we established a novel and highly sensitive method for viral glycan profiling of HBsAg using small aliquots of patient serum. Our lectin microarray system could sensitively profile the glycans exposed on HBV while retaining the intact viral particle structure under nonreducing conditions. Several typical lectins were chosen from the lectin microarray results. Specifically, jacalin, which recognizes O-glycan, showed specific and strong reactivity to the M-HBsAg required for Dane particle secretion. Employing the lectin-fractionation method using jacalin, HBV particles were fractionated into jacalin-bound and unbound fractions from patient serum. We measured HBsAg titer and viral DNA load in each fraction using clinical tests. Interestingly, the jacalin-bound fraction contained a major fraction of the HBV viral DNA load. Thus, in this study we have presented a glycan profiling method for HBsAg on the intact HBV particle and an easy and simple method to enrich Dane particles from patient serum by jacalin fractionation.
中文翻译：
乙型肝炎病毒颗粒的高灵敏聚糖谱分析和丹参颗粒富集的简单方法
乙型肝炎病毒（HBV）是由三种类型的病毒颗粒组成的双链DNA病毒。病毒粒子被称为Dane粒子，其他病毒粒子被称为非感染性亚病毒粒子（SVP）。在血液中，检测到的SVP数量比Dane颗粒高1000-10000倍。丹参颗粒与SVP不同，因为它们具有很强的传染性，因此具有危险性。丹麦人颗粒被称为HBV表面抗原（HBsAg）的糖蛋白包膜所覆盖。HBsAg糖基化参与病毒颗粒的形成和分泌。在这项研究中，我们建立了一种新颖且高度敏感的方法，可使用少量患者血清分装HBsAg的病毒聚糖。我们的凝集素微阵列系统可以灵敏地分析暴露于HBV的聚糖，同时在非还原条件下保留完整的病毒颗粒结构。从凝集素微阵列结果中选择了几种典型的凝集素。具体来说，贾卡林（Jacalin）O-聚糖对Dane颗粒分泌所需的M-HBsAg具有特异性和强反应性。使用贾卡林的凝集素分级方法，将HBV颗粒从患者血清中分为贾卡林结合的和未结合的部分。我们使用临床测试测量了每个部分的HBsAg滴度和病毒DNA载量。有趣的是，结合jacalin的部分包含HBV病毒DNA负载的主要部分。因此，在这项研究中，我们提出了一种在完整的HBV颗粒上进行HBsAg聚糖分析的方法，以及一种通过贾卡林分级分离从患者血清中富集Dane颗粒的简便方法。
更新日期：2018-08-03
中文翻译：
乙型肝炎病毒颗粒的高灵敏聚糖谱分析和丹参颗粒富集的简单方法
乙型肝炎病毒（HBV）是由三种类型的病毒颗粒组成的双链DNA病毒。病毒粒子被称为Dane粒子，其他病毒粒子被称为非感染性亚病毒粒子（SVP）。在血液中，检测到的SVP数量比Dane颗粒高1000-10000倍。丹参颗粒与SVP不同，因为它们具有很强的传染性，因此具有危险性。丹麦人颗粒被称为HBV表面抗原（HBsAg）的糖蛋白包膜所覆盖。HBsAg糖基化参与病毒颗粒的形成和分泌。在这项研究中，我们建立了一种新颖且高度敏感的方法，可使用少量患者血清分装HBsAg的病毒聚糖。我们的凝集素微阵列系统可以灵敏地分析暴露于HBV的聚糖，同时在非还原条件下保留完整的病毒颗粒结构。从凝集素微阵列结果中选择了几种典型的凝集素。具体来说，贾卡林（Jacalin）O-聚糖对Dane颗粒分泌所需的M-HBsAg具有特异性和强反应性。使用贾卡林的凝集素分级方法，将HBV颗粒从患者血清中分为贾卡林结合的和未结合的部分。我们使用临床测试测量了每个部分的HBsAg滴度和病毒DNA载量。有趣的是，结合jacalin的部分包含HBV病毒DNA负载的主要部分。因此，在这项研究中，我们提出了一种在完整的HBV颗粒上进行HBsAg聚糖分析的方法，以及一种通过贾卡林分级分离从患者血清中富集Dane颗粒的简便方法。
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