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Rapid and direct measurement of methyltransferase activity in about 30 minutes
Methods ( IF 4.2 ) Pub Date : 2020-03-01 , DOI: 10.1016/j.ymeth.2019.10.002 Joan M Hevel 1 , Owen M Price 1
Methods ( IF 4.2 ) Pub Date : 2020-03-01 , DOI: 10.1016/j.ymeth.2019.10.002 Joan M Hevel 1 , Owen M Price 1
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Protein arginine methylation is a widespread eukaryotic posttranslational modification that occurs to both histone and non-histone proteins. The S-adenosyl-L-methionine (AdoMet or SAM)-dependent modification is catalyzed by the protein arginine methyltransferase (PRMT) family of enzymes. In the last several years a series of both direct and indirect assay formats have been described that allow the rate of methylation to be measured. Here we provide a detailed protocol to directly measure PRMT activity using radiolabeled AdoMet, reversed-phase resin-filled pipette tips (ZipTips®) and a liquid scintillation counter. Because the ZipTips® based quantitation relies only on the straightforward separation of unreacted AdoMet from a methylated substrate, this protocol should be readily adaptable to other methyltransferases. The method is fast, simple to employ with both peptide and protein substrates, and produces very little radioactive waste.
中文翻译：
在大约 30 分钟内快速直接测量甲基转移酶活性
蛋白质精氨酸甲基化是一种广泛存在的真核生物翻译后修饰，发生在组蛋白和非组蛋白上。S-腺苷-L-甲硫氨酸（AdoMet 或 SAM）依赖性修饰由蛋白质精氨酸甲基转移酶 (PRMT) 家族酶催化。在过去几年中，已经描述了一系列直接和间接测定形式，可以测量甲基化速率。在这里，我们提供了使用放射性标记的 AdoMet、反相树脂填充移液器吸头 (ZipTips®) 和液体闪烁计数器直接测量 PRMT 活动的详细协议。由于基于 ZipTips® 的定量仅依赖于未反应的 AdoMet 与甲基化底物的直接分离，因此该方案应该很容易适用于其他甲基转移酶。方法很快，
更新日期：2020-03-01
中文翻译：
在大约 30 分钟内快速直接测量甲基转移酶活性
蛋白质精氨酸甲基化是一种广泛存在的真核生物翻译后修饰，发生在组蛋白和非组蛋白上。S-腺苷-L-甲硫氨酸（AdoMet 或 SAM）依赖性修饰由蛋白质精氨酸甲基转移酶 (PRMT) 家族酶催化。在过去几年中，已经描述了一系列直接和间接测定形式，可以测量甲基化速率。在这里，我们提供了使用放射性标记的 AdoMet、反相树脂填充移液器吸头 (ZipTips®) 和液体闪烁计数器直接测量 PRMT 活动的详细协议。由于基于 ZipTips® 的定量仅依赖于未反应的 AdoMet 与甲基化底物的直接分离，因此该方案应该很容易适用于其他甲基转移酶。方法很快，
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