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RNA沉默蛋白及其RNA靶标的p19病毒抑制子的特定位点交叉连接，使用扩展的遗传密码。
Biochemistry ( IF 2.9 ) Pub Date : 2019-07-22 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.biochem.9b00428 Noreen Ahmed 1 , Dana V Foss 2 , Megan H Powdrill 1 , John Paul Pezacki 1, 2
Biochemistry ( IF 2.9 ) Pub Date : 2019-07-22 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.biochem.9b00428 Noreen Ahmed 1 , Dana V Foss 2 , Megan H Powdrill 1 , John Paul Pezacki 1, 2
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RNA沉默蛋白的p19病毒抑制剂具有很高的亲和力，可与小RNA如小干扰RNA（siRNA）结合，因此在生物技术中具有有用的应用。同样，其在研究和调控microRNA方面的应用也在积极扩展。在这里，我们证明了可光活化的非天然氨基酸p-叠氮基l的成功位点特异性掺入-苯丙氨酸（AzF），用于将RNA底物交联到p19序列中。AzF的掺入是在蛋白质中靠近RNA结合位点的三个位置进行的：K67，R115和T111。在p19的T111位置掺入AzF不会影响p19对siRNA的结合亲和力，并且还显示出对人microRNA miR-122的纳摩尔亲和力。在其他两个位置引入AzF时，亲和力较差，表明非天然氨基酸位置的敏感性。T111AzF与siRNA或miRNA的复合物暴露在紫外线下会导致蛋白质与RNA交联，但野生型蛋白质无法检测到交联。我们的结果表明，p19-T111AzF可用于检测小分子RNA，包括人miR-122，
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更新日期：2019-07-22
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