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CRISPR阵列的模块化一锅组装可实现文库生成，并揭示影响crRNA生物发生的因素。
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2019-07-03 , DOI: 10.1038/s41467-019-10747-3 Chunyu Liao 1, 2 , Fani Ttofali 1 , Rebecca A Slotkowski 1 , Steven R Denny 1 , Taylor D Cecil 1 , Ryan T Leenay 1 , Albert J Keung 1 , Chase L Beisel 1, 2, 3
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更新日期：2019-07-03
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2019-07-03 , DOI: 10.1038/s41467-019-10747-3 Chunyu Liao 1, 2 , Fani Ttofali 1 , Rebecca A Slotkowski 1 , Steven R Denny 1 , Taylor D Cecil 1 , Ryan T Leenay 1 , Albert J Keung 1 , Chase L Beisel 1, 2, 3
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CRISPR-Cas系统固有地通过CRISPR阵列进行多路复用-防御不同的入侵者还是介导多目标编辑，调控，成像或传感。但是，由于重复出现重复序列，阵列仍然难以生成。在这里，我们报告一种称为CRATES的模块化单罐方案，以构建CRISPR阵列和阵列文库。CRATES允许使用间隔物的修整部分内定义的组装连接点来组装重复间隔子亚基。使用CRATES，我们构建了单效应子核酸酶Cas9，Cas12a和Cas13a的阵列，它们在无细胞系统，细菌和酵母菌中介导了DNA / RNA的多重切割和基因调控。CRATES还允许一锅式构建由多个Cas核酸酶利用的阵列库和复合阵列。最后，阵列表征揭示了来自Cas12a末端重复序列的无关CRISPR RNA的加工以及通过全局RNA结构形成而导致的RNA定向核酸酶活性的序列依赖性和上下文依赖性丧失。因此，CRATES可以促进多样化的多重应用，并有助于确定影响crRNA生物发生的因素。
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