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Ca2 +成像的遗传编码荧光/生物发光双峰指标。
ACS Sensors ( IF 8.2 ) Pub Date : 2019-07-05 , DOI: 10.1021/acssensors.9b00531
Israt Farhana 1 , Md Nadim Hossain 1 , Kazushi Suzuki 1 , Tomoki Matsuda 1, 2 , Takeharu Nagai 1, 2
ACS Sensors ( IF 8.2 ) Pub Date : 2019-07-05 , DOI: 10.1021/acssensors.9b00531
Israt Farhana 1 , Md Nadim Hossain 1 , Kazushi Suzuki 1 , Tomoki Matsuda 1, 2 , Takeharu Nagai 1, 2
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荧光和生物发光的遗传编码的Ca2 +指示剂(GECIs)是监测大量细胞事件中Ca2 +动态的必不可少的工具。尽管荧光GECI具有高的时空分辨率,但由于外部照明会导致标本发生光毒性和自发荧光,因此它们的应用通常仅限于短期成像。生物发光GECI通过增强与光遗传学操纵和光生理过程的兼容性来克服这些陷阱。但是,它们在时空分辨率上受到损害。因此,一直致力于使用具有荧光和生物发光GECI优点的Ca2 +指示剂,以用于广泛的应用领域。为了解决这个问题,我们开发了一种高亲和力的双峰GECI,GLICO,使用基于单个荧光蛋白的GECI与拆分的萤光素酶组合。通过这种新颖的设计,融合蛋白变成双峰的,并具有与其荧光祖先相似的Ca2 +传感特性,并赋予基于生物发光的Ca2 +成像功能。在所有生物发光GECI中,生物发光模式下的GLICO具有最高的动态范围(2200%)。我们展示了GLICO在研究每种模式下不同培养细胞中胞质Ca2 +动力学方面的性能。出于在高Ca2 +含量细胞器中进行Ca2 +成像的目的,我们还创建了低亲和力变体ReBLICO,并在荧光和生物发光模式下对ER进行了Ca2 +成像。
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更新日期:2019-06-24
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