当前位置：
X-MOL 学术
›
J. Am. Chem. Soc.
›
论文详情
Our official English website, www.x-mol.net, welcomes your
feedback! (Note: you will need to create a separate account there.)
CRISPR/Cas9 动力学机制揭示的功能见解
Journal of the American Chemical Society ( IF 14.4 ) Pub Date : 2018-02-19 , DOI: 10.1021/jacs.7b13047 Austin T Raper 1 , Anthony A Stephenson 1 , Zucai Suo 1
Affiliation
|
原核适应性免疫的发现促使 RNA 引导的成簇规则间隔短回文重复 (CRISPR) 相关 (Cas) 核酸内切酶 Cas9 广泛用于基因工程。然而，其动力学机制仍不清楚，DNA 切割的细节也知之甚少。在这里，我们建立了化脓性链球菌 Cas9 从引导 RNA 结合到 DNA 切割和产物释放的动力学机制。 DNA 与 Cas9 和向导 RNA 的二元复合物的结合在第一次催化周转期间是限速的，而 DNA 从预先形成的 Cas9、向导 RNA 和 DNA 的三元复合物中裂解是快速的。此外，DNA产物的极其缓慢的释放本质上限制了Cas9作为单周转酶。通过同时测量Cas9的HNH和RuvC核酸酶活性对DNA切割的贡献，我们还揭示了HNH构象调节RuvC切割活性的动力学基础。总之，我们的结果提供了有关 Cas9 的关键动力学和功能细节，这将为基因编辑实验提供信息，指导未来的研究以了解 Cas9 的脱靶 DNA 切割，并有助于 Cas9 作为生物技术工具的持续发展。
"点击查看英文标题和摘要"
京公网安备 11010802027423号