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非对称流场流分离技术用于外泌体和小细胞外囊泡的分离和表征。
Nature Protocols ( IF 13.1 ) Pub Date : 2019-03-04 , DOI: 10.1038/s41596-019-0126-x
Haiying Zhang 1 , David Lyden 1
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我们描述了用于分离和表征细胞外纳米颗粒(ENP),特别是小的细胞外囊泡(sEVs)(称为外泌体)以及甚至更小的新型纳米颗粒(称为外泌体)的非对称流场流分离(AF4)技术的协议开发和优化。这项技术可根据流体动力学大小对ENP进行分级分离,并展示出独特的分离纳米颗粒的能力,这些纳米颗粒的大小范围从几纳米到不确定的微米水平。ENP通过两个垂直流动(通道流动和交叉流动)分解,该流动是在带有半许可底壁膜的薄而平坦的通道中进行的。与其他用于ENP分析的分离方法相比,AF4分离方法具有多个优势,包括无标记,温和,快速(<1小时)和高度可重复性,以及提供有效的分析物回收。最重要的是,与其他可用技术相比,AF4可以以高分辨率(1 nm)分离ENP,并提供基于尺寸的分离的大动态范围。与实时监控器(例如UV吸收和动态光散射(DLS))以及一系列分离后特征结合使用,AF4有助于成功分离外泌体的不同子集并鉴定外泌体。尽管通过超速离心(UC)进行细胞培养和从条件培养基中分离ENP的整个过程可能需要约3 d,但AF4分离步骤仅需1 h。这项技术的用户需要AF4的工作原理方面的专业知识,才能操作和定制协议应用程序。AF4可以促进高质量的发展,



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更新日期:2019-03-05
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