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Developing Polysulfide-Sensitive GFPs for Real-Time Analysis of Polysulfides in Live Cells and Subcellular Organelles.
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2019-02-22 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.analchem.8b04634 Xin Hu 1, 2 , Huanjie Li 1 , Xi Zhang 1 , Zhigang Chen 1 , Rui Zhao 1 , Ningke Hou 1 , Jihua Liu 2 , Luying Xun 1, 3 , Huaiwei Liu 1
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2019-02-22 00:00:00 , DOI: 10.1021/acs.analchem.8b04634 Xin Hu 1, 2 , Huanjie Li 1 , Xi Zhang 1 , Zhigang Chen 1 , Rui Zhao 1 , Ningke Hou 1 , Jihua Liu 2 , Luying Xun 1, 3 , Huaiwei Liu 1
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Polysulfides are newly discovered cellular contents, and they are involved in multiple intracellular processes, including redox homeostasis and protein sulfhydration. The dynamic changes of polysulfides inside the cell are directly related to these processes. To monitor the intracellular dynamics and subcellular levels of polysulfides, we developed green-fluorescent-protein (GFP)-based probes that are polysulfide-specific. A pair of cysteine residues was introduced near the GFP chromophore with the spatial distance between the cysteine residues designed to allow the formation of internal −Sn– (n ≥ 3) bonds but not −S2– (disulfide) bonds. We tested these probes in model microorganisms and found that they displayed ratiometric changes to intracellular polysulfides that had clear variations associated with the growth phases. The distribution of polysulfides in subcellular organelles is heterogeneous, suggesting that polysulfides have multiple origins and functions in cells. These probes provided long-desired tools for polysulfide in vivo studies.
中文翻译：
开发用于实时分析活细胞和亚细胞器中多硫化物的多硫化物敏感性GFP。
多硫化物是新发现的细胞内含物，它们参与多个细胞内过程，包括氧化还原稳态和蛋白质巯基化。细胞内多硫化物的动态变化与这些过程直接相关。为了监测多硫化物的细胞内动力学和亚细胞水平，我们开发了基于绿色荧光蛋白（GFP）的多硫化物特异性探针。一对半胱氨酸残基的被附近的发色团GFP导入有设计成允许内部-S形成的半胱氨酸残基之间的空间距离ñ - （Ñ ≥3）键，但不是-S 2–（二硫键）。我们在模型微生物中测试了这些探针，发现它们显示出对细胞内多硫化物的比例变化，该变化具有与生长期相关的明显变化。多硫化物在亚细胞器中的分布是不均匀的，这表明多硫化物在细胞中具有多种起源和功能。这些探针提供了长期期望的用于多硫化物体内研究的工具。
更新日期：2019-02-22
中文翻译：
开发用于实时分析活细胞和亚细胞器中多硫化物的多硫化物敏感性GFP。
多硫化物是新发现的细胞内含物，它们参与多个细胞内过程，包括氧化还原稳态和蛋白质巯基化。细胞内多硫化物的动态变化与这些过程直接相关。为了监测多硫化物的细胞内动力学和亚细胞水平，我们开发了基于绿色荧光蛋白（GFP）的多硫化物特异性探针。一对半胱氨酸残基的被附近的发色团GFP导入有设计成允许内部-S形成的半胱氨酸残基之间的空间距离ñ - （Ñ ≥3）键，但不是-S 2–（二硫键）。我们在模型微生物中测试了这些探针，发现它们显示出对细胞内多硫化物的比例变化，该变化具有与生长期相关的明显变化。多硫化物在亚细胞器中的分布是不均匀的，这表明多硫化物在细胞中具有多种起源和功能。这些探针提供了长期期望的用于多硫化物体内研究的工具。
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