AbstractAn electrochemical method is described for the sensitive detection of the activity of the enzyme T4 polynucleotide kinase (PNK) by using a DNA functionalized porphyrinic metal-organic framework (L/(Fe-P)n-MOF). In the presence of PNK, the hairpin oligonucleotide (HP1) becomes phosphorylated, and the trigger is released by lambda exonuclease (λ exo). The trigger DNA hybridizes with hairpin probe (immobilized on the gold electrode) to form a nicking endonuclease cleavage site. Thus, a single-strand capture probe is employed to hybridize with L/(Fe-P)n-MOF. The (Fe-P)n-MOF is a peroxidase mimicking material with high catalytic efficiency. By using this amplification strategy, an electrochemical signal is procured that allows for the determination of T4 PNK in the 1.0 mU·mL−1 to 1.0 U·mL−1 with a detection limit of 0.62 mU·mL−1. The method is selective and can be used to screen for enzyme inhibitors. Conceivably, the (Fe-P)n-MOF can also be used to detect other analytes via its peroxidase-mimicking activity. Graphical abstractSchematic presentation of T4 polynucleotide kinase (PNK) detection. Two hairpin DNAs (HP) and a porphyrinic metal-organic framework with peroxidase-mimicking activity are used. The detection limit is 0.62 mU mL−1 with enzyme assisted signal amplification. This method is selective and can be used to screen for enzyme inhibitors.

中文翻译：

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一种 DNA 功能化的卟啉金属有机框架作为过氧化物酶模拟催化剂，用于安培法测定 T4 多核苷酸激酶的活性

摘要描述了一种使用 DNA 功能化卟啉金属有机骨架 (L/(Fe-P)n-MOF) 灵敏检测酶 T4 多核苷酸激酶 (PNK) 活性的电化学方法。在存在 PNK 的情况下，发夹寡核苷酸 (HP1) 被磷酸化，并且触发因子由 lambda 核酸外切酶 (λ exo) 释放。触发 DNA 与发夹探针（固定在金电极上）杂交以形成切口核酸内切酶切割位点。因此，采用单链捕获探针与 L/(Fe-P)n-MOF 杂交。(Fe-P)n-MOF 是一种具有高催化效率的过氧化物酶模拟材料。通过使用这种放大策略，获得了一种电化学信号，可以测定 1.0 mU·mL-1 至 1.0 U·mL-1 中的 T4 PNK，检测限为 0.62 mU·mL-1。该方法具有选择性，可用于筛选酶抑制剂。可以想象，(Fe-P)n-MOF 也可以通过其过氧化物酶模拟活性用于检测其他分析物。图解摘要 T4 多核苷酸激酶 (PNK) 检测的示意图。使用了两个发夹 DNA (HP) 和一个具有过氧化物酶模拟活性的卟啉金属有机框架。检测限为 0.62 mU mL-1，酶辅助信号放大。该方法具有选择性，可用于筛选酶抑制剂。使用了两个发夹 DNA (HP) 和一个具有过氧化物酶模拟活性的卟啉金属有机框架。检测限为 0.62 mU mL-1，酶辅助信号放大。该方法具有选择性，可用于筛选酶抑制剂。使用了两个发夹 DNA (HP) 和一个具有过氧化物酶模拟活性的卟啉金属有机框架。检测限为 0.62 mU mL-1，酶辅助信号放大。该方法具有选择性，可用于筛选酶抑制剂。