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Inner Filter Effect-Based Sensor for Horseradish Peroxidase and Its Application to Fluorescence Immunoassay
ACS Sensors ( IF 8.2 ) Pub Date : 2018-01-03 00:00:00 , DOI: 10.1021/acssensors.7b00830 Jian Sun 1 , Jiahui Zhao 1, 2 , Lei Wang 1 , Hongwei Li 3 , Fan Yang 1 , Xiurong Yang 1
ACS Sensors ( IF 8.2 ) Pub Date : 2018-01-03 00:00:00 , DOI: 10.1021/acssensors.7b00830 Jian Sun 1 , Jiahui Zhao 1, 2 , Lei Wang 1 , Hongwei Li 3 , Fan Yang 1 , Xiurong Yang 1
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Being an important model peroxidase, horseradish peroxidase (HRP) has been thoroughly understood, and the detection of HRP is not only directly related to peroxidase-triggered catalytic process, but also linked to the development of HRP-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Herein, we have reported an unconventional fluorescent sensor for convenient assay of HRP activity based on the HRP-catalyzed specific conversion of p-phenylenediamine (PPD) into chromogenic PPDox with H2O2 as the oxidizing agent, accompanied by the fluorescence quenching effect on fluorescein. By combining UV–vis absorption spectrum, isothermal titration calorimetry, and fluorescence lifetime analysis, we have confirmed the inner filter effect as a main quenching mechanism in our proposed fluorescent assay. According to the intrinsic sensitivity of fluorescent sensor and high selectivity, our PPD/fluorescein-based sensing system can be utilized for real-time monitoring of the HRP activity in real biological samples. Furthermore, the unambiguous response mechanism and excellent sensing performance encourage us to extend such HRP assay into the HRP-based fluorescent ELISA, which has a broad prospect of application in fluorescent diagnosis of hepatocellular carcinoma (HCC) by sensing alpha-fetoprotein, the well-known serologic HCC marker.
中文翻译：
基于内滤效应的辣根过氧化物酶传感器及其在荧光免疫分析中的应用
作为一种重要的过氧化物酶模型，辣根过氧化物酶（HRP）已被彻底了解，HRP的检测不仅与过氧化物酶触发的催化过程直接相关，而且与基于HRP的酶联免疫吸附测定（ELISA）的发展有关。 ）。在本文中，我们已经报道了一种非常规荧光传感器，用于基于HRP催化的对苯二胺（PPD）转化为具有H 2 O 2的发色PPDox的HRP活性的简便测定方法作为氧化剂，伴随着荧光素的荧光猝灭作用。通过结合紫外可见吸收光谱，等温滴定热法和荧光寿命分析，我们已经证实了内部滤光片效应是我们提出的荧光测定法中的主要猝灭机制。根据荧光传感器的固有灵敏度和高选择性，我们基于PPD /荧光素的传感系统可用于实时监测实际生物样品中的HRP活性。此外，明确的反应机制和出色的传感性能鼓励我们将这种HRP测定法扩展到基于HRP的荧光ELISA中，通过检测甲胎蛋白，良好的甲胎蛋白，其在肝细胞癌（HCC）的荧光诊断中具有广阔的应用前景。已知的血清学HCC标志物。
更新日期：2018-01-03
中文翻译：
基于内滤效应的辣根过氧化物酶传感器及其在荧光免疫分析中的应用
作为一种重要的过氧化物酶模型，辣根过氧化物酶（HRP）已被彻底了解，HRP的检测不仅与过氧化物酶触发的催化过程直接相关，而且与基于HRP的酶联免疫吸附测定（ELISA）的发展有关。 ）。在本文中，我们已经报道了一种非常规荧光传感器，用于基于HRP催化的对苯二胺（PPD）转化为具有H 2 O 2的发色PPDox的HRP活性的简便测定方法作为氧化剂，伴随着荧光素的荧光猝灭作用。通过结合紫外可见吸收光谱，等温滴定热法和荧光寿命分析，我们已经证实了内部滤光片效应是我们提出的荧光测定法中的主要猝灭机制。根据荧光传感器的固有灵敏度和高选择性，我们基于PPD /荧光素的传感系统可用于实时监测实际生物样品中的HRP活性。此外，明确的反应机制和出色的传感性能鼓励我们将这种HRP测定法扩展到基于HRP的荧光ELISA中，通过检测甲胎蛋白，良好的甲胎蛋白，其在肝细胞癌（HCC）的荧光诊断中具有广阔的应用前景。已知的血清学HCC标志物。
京公网安备 11010802027423号