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新型外标记整合素揭示了它们在活细胞中的运输。
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2017-09-18 , DOI: 10.1038/s41467-017-00646-w
Clotilde Huet-Calderwood 1 , Felix Rivera-Molina 2 , Daniel V Iwamoto 1 , Emil B Kromann 2, 3 , Derek Toomre 2 , David A Calderwood 1, 2
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整合素是多细胞生物中必需的丰富的异二聚体细胞表面粘附受体。整合素功能是通过内胞外运输动态调节的,然而,关于其在活细胞中何时、何地以及如何发生的主要谜团仍然存在。为了解决这个问题,我们在这里报告了功能性重组 β1 整合素的生成,并在细胞外环中插入了可追踪标签。我们证明这些“外标记”整合素是细胞表面表达的,定位于粘附,表现出正常的整合素激活,并在β1整合素敲除的成纤维细胞中恢复粘附。重要的是,含有细胞外 pH 敏感的 pHluorin 标签的 β1 整合素可以直接观察活细胞中的整合素胞吐作用,并揭示整合素囊泡向粘着斑的靶向递送。此外,将含有 HaloTag 的 β1 整合素与膜渗透性和非渗透性 Halo 染料结合使用,可以对整合素内吞作用和再循环进行成像。因此,外标记整合素提供了新的强大工具来表征整合素功能和运输。整合素是细胞表面粘附受体,受内胞外运输调节,但研究该过程的现有工具可能会干扰功能。在这里,作者开发了在细胞外域携带可追踪标签的 β1 整合素;pH 敏感的 pHlourin 标签或 HaloTag 有助于染料附着。



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更新日期:2017-09-18
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