黄病毒是严重的人类病原体，通常缺乏治疗方法。375 kDa病毒多蛋白的蛋白水解成熟是抗病毒发展的目标之一。黄病毒丝氨酸蛋白酶由多功能非结构蛋白3（NS3）的N末端结构域和病毒蛋白NS2B中的必需40残基辅因子（NS2B（40））组成。NS2B-NS3蛋白酶负责病毒多蛋白成熟中的所有细胞质切割事件。这项研究描述了使用全长NS3的黄病毒蛋白酶活性的第一个生化特征。通过将西尼罗河病毒（WNV）NS2B（40）与全长WNV NS3融合来产生重组蛋白酶。该蛋白酶催化了两个自溶切割。纯化蛋白质之前，先切断NS2B / NS3连接。在NS（3）的C末端解旋酶区域内降低Gly（460）的Arg（459）的第二个位点被切割得更慢。自溶性裂解反应还发生在来自黄热病病毒，2型和4型登革热病毒以及日本脑炎病毒的NS2B-NS3重组蛋白中。使用不可切割的WNV蛋白酶变体和两种底物区分顺式和反式切割，如下所示：重组WNV NS2B-NS3的无活性变体，以及由包含天然切割位点的十二聚肽融合的蓝绿色和黄色荧光蛋白。使用这些材料，发现自溶裂解仅是分子内的。解旋酶位点的自溶切割对蛋白质稀释不敏感，证实自溶是分子内的。发现形成活性蛋白酶既不需要从NS3裂解NS2B，也不需要游离的NS3 N末端。还获得了通过NS2B的切割的C末端对蛋白酶的产物抑制的证​​据。



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