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CRISPR/Cpf1 介导的无 DNA 植物基因组编辑。
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2017-02-16 , DOI: 10.1038/ncomms14406
Hyeran Kim 1 , Sang-Tae Kim 1 , Jahee Ryu 1 , Beum-Chang Kang 1 , Jin-Soo Kim 1, 2 , Sang-Gyu Kim 1
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Cpf1 是一种 V 型 CRISPR 效应子，可识别富含胸苷的原型间隔子相邻基序，并在单个 CRISPR RNA (crRNA) 引导下在靶位点诱导内聚双链断裂。在这里，我们证明 Cpf1 可用作植物基因组的无 DNA 编辑工具。我们描述了将重组 Cpf1 蛋白与体外转录或化学合成的靶标特异性 crRNA 一起递送到从大豆和野生烟草中分离的原生质体中。设计的crRNA是独特的，并且在整个大豆参考基因组中没有相似的序列（≤3个错配）。靶向深度测序分析表明，在大豆中的 FAD2 旁系同源物和野生烟草中的 AOC 中成功诱导了突变。与 SpCas9 不同，Cpf1 主要诱导靶位点的各种核苷酸缺失。在大豆基因组的潜在脱靶位点没有检测到显着突变。这些结果表明Cpf1-crRNA复合物是一种有效的无DNA基因组编辑工具，用于植物基因组编辑。
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