通过对氢诱导极化 （PHIP） 对小肽进行超极化以提高核磁共振 （NMR） 技术的灵敏度已经得到广泛认可，而其在大型生物聚合物中的应用仍然是一个主要未开发的领域。一个特殊的挑战是存在折叠必需的二硫键。它们往往会形成金属络合物，从而阻碍催化加氢，而催化氢化是 PHIP 的先决条件。我们应用 PHIP 技术来增强胱氨酸结微型蛋白中的 NMR 信号强度——由三种二硫键共价稳定的高度有序的肽结构。为了实现 PHIP，我们在天然胰蛋白酶抑制剂 MCoTI-II 的三种合成开链变体的不同位置引入了 l-炔丙基酪氨酸标记。对于折叠的胱氨酸结，我们观察到 NMR 信号在甲醇中增强高达 499，在 D₂O-甲醇混合物中高达 307，在含半胱氨酸的还原前体中增强高达 964。胰蛋白酶抑制测定阐明，将 PHIP 标记引入末端区域比改变功能环内以保持生物活性更可取。天然酪氨酸的取代导致最高的生物活性。由于氢化较慢，在胰蛋白酶存在下观察到 PHIP 增强急剧降低，这由酶-抑制剂复合物内标记物的可及性为条件。



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