BACKGROUND In addition to FcεRI, a subtype of human mast cells (MCs) expresses Mas-related G-protein coupled receptor X2 (MRGPRX2, mouse counterpart MrgprB2). Although MrgprB2 contributes to IgE-mediated passive systemic anaphylaxis (PSA) in vivo, an MRGPRX2 inhibitor (C9) does not block MrgprB2-mediated or IgE-mediated MC degranulation in vitro. OBJECTIVE To generate mice expressing human MRGPRX2 to study receptor function in vitro and PSA in vivo. METHODS CRISPR/Cas9-mediated gene editing approach was utilized to replace endogenous MrgprB2 with human MRGPRX2 in mice (MRGPRX2-KI mice). MRGPRX2 expression in the skin, gingiva, trachea, and colon were evaluated using an anti-human MRGPRX2 antibody. Peritoneal MCs (PMCs) cultured from wild-type (WT), MRGPRX2-KI and MrgprB2-/- mice were used to study agonists-induced degranulation. The effects of selective MRGPRX2 inhibitors (C9 and C9-6) on substance P or IgE-mediated MC degranulation in vitro, and IgE-mediated passive systemic anaphylaxis (PSA) in vivo were tested. RESULTS MRGPRX2-expressing MCs were present in tissues of MRGPRX2-KI mice. Most agonists tested induced greater degranulation at lower concentrations in PMCs from MRGPRX2-KI mice than cells from WT mice. Furthermore, C9 and C9-6 inhibited degranulation in MRGPRX2-KI PMCs in response to substance P. By contrast, they had no effect on IgE-mediated degranulation in vitro but inhibited PSA in MRGPRX2-KI mice in vivo. CONCLUSIONS MRGPRX2-KI mice provide a readily available source of primary MCs for signaling studies. Furthermore, transactivation of MRGPRX2 contributes to IgE-mediated PSA, suggesting that MRGPRX2-KI mice could be utilized as a preclinical model for testing novel therapeutics targeting MRGPRX2 and its crosstalk with FcεRI.

中文翻译：

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MRGPRX2 在新建立的敲入小鼠模型中促进 IgE 介导的系统性过敏反应。


背景 除 FcεRI 外，人肥大细胞 （MC） 的一种亚型还表达 Mas 相关 G 蛋白偶联受体 X2 （MRGPRX2，小鼠对应物 MrgprB2）。尽管 MrgprB2 在体内有助于 IgE 介导的被动全身性过敏反应 （PSA），但 MRGPRX2 抑制剂 （C9） 在体外不会阻断 MrgprB2 介导或 IgE 介导的 MC 脱颗粒。目的 生成表达人类 MRGPRX2 的小鼠，以研究体外受体功能和体内 PSA。方法 采用 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑方法在小鼠 （MRGPRX2-KI 小鼠） 中用人 MRGPRX2 替代内源性 MrgprB2。使用抗人 MRGPRX2 抗体评估皮肤、牙龈、气管和结肠中MRGPRX2表达。使用野生型 （WT） 、 MRGPRX2-KI 和 MrgprB2 - /- 小鼠培养的腹膜 MCs （PMC） 研究激动剂诱导的脱颗粒。测试选择性 MRGPRX2 抑制剂 （C9 和 C9-6） 对体外 P 物质或 IgE 介导的 MC 脱颗粒的影响，以及 IgE 介导的体内被动全身性过敏反应 （PSA） 的影响。结果 表达 MRGPRX2 的 MCs 存在于 MRGPRX2-KI 小鼠的组织中。与 WT 小鼠的细胞相比，测试的大多数激动剂在 MRGPRX2-KI 小鼠的 PMC 中诱导的较低浓度下诱导的脱颗粒更大。此外，C9 和 C9-6 抑制 MRGPRX2-KI PMC 响应 P 物质的脱颗粒。相比之下，它们在体外对 IgE 介导的脱颗粒没有影响，但在体内抑制了 MRGPRX2-KI 小鼠的 PSA。结论 MRGPRX2-KI 小鼠为信号研究提供了现成的原代 MCs 来源。此外，MRGPRX2 的反式激活有助于 IgE 介导的 PSA，表明 MRGPRX2-KI 小鼠可用作测试靶向 MRGPRX2 的新型疗法及其与 FcεRI 的串扰的临床前模型。