人乳铁蛋白 （HLF） 是一种属于转铁蛋白家族的关键铁结合糖蛋白，是母乳中的主要免疫蛋白。目前，重组 HLF 在微生物中的表达引起了广泛关注。通过基因组整合和拷贝数优化，本研究建立了一个 Komagataella phaffii 细胞工厂，HLF 滴度达到 137.6 mg/L。然而，HLF 在细胞内广泛积累。随后，筛选了几种内源性信号肽并与交配因子 α 杂交，导致细胞外 HLF 滴度与对照相比增加了 1.56 倍。此外，蛋白激酶 II 过表达促进了囊泡运输，进一步将细胞外 HLF 在摇瓶中提高到 304.6 mg/L 滴度，在 3 L 生物反应器中达到 1.7 g/L。值得注意的是，细胞内/细胞外 HLF 浓度比从 1.69：1 降低到 1.01：1。通过离子优化和指数甲醇补料策略进一步增强，细胞外 HLF 滴度为 3.1 g/L。据我们所知，这是第一项报告通过优化运输和分泌途径显着改善细胞外 HLF 产生的研究，并提供了对 K. phaffii 中其他分泌人蛋白表达的见解。



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