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用于定量 STORM 成像的电化学控制荧光团闪烁
Nature Photonics ( IF 32.3 ) Pub Date : 2024-04-19 , DOI: 10.1038/s41566-024-01431-0 Ying Yang , Yuanqing Ma , Jonathan F. Berengut , Lawrence K. Lee , Richard D. Tilley , Katharina Gaus , J. Justin Gooding
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更新日期:2024-04-19
Nature Photonics ( IF 32.3 ) Pub Date : 2024-04-19 , DOI: 10.1038/s41566-024-01431-0 Ying Yang , Yuanqing Ma , Jonathan F. Berengut , Lawrence K. Lee , Richard D. Tilley , Katharina Gaus , J. Justin Gooding
随机光学重建显微镜 (STORM) 通过从时间和空间上的荧光团发射分离中计算单个荧光团的坐标,实现单分子分辨率的宽视场成像。这种分离是通过在长寿命关闭状态和发射开启状态之间光切换荧光团来实现的。尽管 STORM 可以对单个分子进行成像,但分子计数仍然具有挑战性,因为光漂白或重叠染料会导致计数不足,而染料重复随机闪烁会导致计数过多。在这里,我们展示了可以通过电化学方式切换荧光团以进行 STORM 成像 (EC-STORM),并对切换动力学、占空比和回收率具有出色的控制。使用 EC-STORM,我们通过使用电化学势来控制染料的光物理来演示分子计数。染料的随机闪烁受到负电位的抑制,但开启事件可以通过短的正电位脉冲激活,使得开启事件的频率与底层染料的数量成线性比例。我们还展示了固定细胞中微管蛋白的 EC-STORM,空间分辨率低至约 28 nm,并对各种 DNA 纳米尺结构上的单个 Alexa 647 荧光团进行计数。这种对荧光团切换的控制将使 EC-STORM 能够广泛应用于超分辨率成像和分子计数。
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