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重新利用 CRISPR-Cas13 系统进行稳健的 mRNA 反式剪接

Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2024-03-14 , DOI: 10.1038/s41467-024-46172-4
David N Fiflis 1 , Nicolas A Rey 2 , Harshitha Venugopal-Lavanya 1 , Beatrice Sewell 2 , Aaron Mitchell-Dick 2 , Katie N Clements 2 , Sydney Milo 1 , Abigail R Benkert 2 , Alan Rosales 1 , Sophia Fergione 2 , Aravind Asokan 1, 2, 3
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VI 型 CRISPR 酶已被开发为用于真核 RNA 编辑的可编程 RNA 引导 Cas 蛋白。值得注意的是,Cas13 已用于位点靶向单碱基编辑、去甲基化、RNA 切割或敲低以及选择性剪接。然而,编辑大段 mRNA 转录本的能力仍然是一个重大挑战。在这里,我们证明 CRISPR-Cas13 系统可以重新利用以帮助将外源 RNA 片段反式剪接成内源性前 mRNA 转录本,这种方法称为 CRISPR Assisted mRNA Fragment Trans-splicing (CRAFT)。使用基于分裂报告基因的分析,我们评估正交 Cas13 系统,优化向导 RNA 长度并筛选一系列内含子靶标的最佳反式剪接位点。与其他剪接体介导的反式剪接方法相比,我们在各种哺乳动物细胞类型中实现了对不同内源性 mRNA 中大 5' 和 3' 片段的编辑的显著改进。CRAFT 可以作为连接蛋白质标签、研究多个突变/单核苷酸多态性、非翻译区修饰 (UTR) 或替换大段 mRNA 转录本的多功能平台。





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更新日期:2024-03-14
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