自SARS-CoV-2出现以来，该病毒RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）所有亚基的突变已被多次报道。尽管 RdRp 是抗病毒药物的主要靶点，但探索这些突变表型效应的实验研究仍然有限。本研究重点关注三个 RdRp 亚基（nsp7、nsp8 和 nsp12）中取代的表型效应，根据其发生率和潜在影响进行选择。我们采用纳米差示扫描荧光法和微尺度热泳来检查这些突变对蛋白质稳定性和 RdRp 复合物组装的影响。我们观察到不同的影响；值得注意的是，nsp8 中的单个突变显着增加了其稳定性，熔解温度增加了 13℃，而 nsp7 和 nsp8 中的某些突变在 RdRp 复合物形成过程中降低了它们与 nsp12 的结合亲和力。使用荧光酶测定，我们评估了对 RNA 聚合酶活性的总体影响。我们发现大多数检查的突变改变了聚合酶活性，通常是稳定性或与 RdRp 复合物其他成分的亲和力变化的直接结果。有趣的是，nsp8 A21V 和 nsp12 P323L 突变的组合导致聚合酶活性增加 50%。此外，RdRp 亚基中的一些检查取代显着影响了 RdRp 对瑞德西韦的敏感性，突出了它们对治疗策略的潜在影响。据我们所知，这是第一项证明氨基酸突变对新兴 SARS-CoV-2 亚变体中构成 RdRp 复合物的所有成分的影响的生化研究。



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