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基于CRISPR/Cas13a系统的BmNPV快速视觉检测技术的开发
Journal of Invertebrate Pathology ( IF 3.6 ) Pub Date : 2024-02-08 , DOI: 10.1016/j.jip.2024.108072 Xue-Min Zhou 1 , Zhen-Yu Shen 1 , Yi-Xiang Wu 1 , Su Lin 1 , Meng-Dong Wang 2 , Tao Xu 1 , Lu-Lai Wang 1 , Samreen Sadiq 1 , Xin-Hao Jiao 1 , Ping Wu 2
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蚕病原微生物是威胁蚕业高质量发展的重要因素。其中,家蚕核多角体病毒(BmNPV)引起的病害常导致疫情频繁、死亡率高,给蚕业造成巨大损失。目前BmNPV的分子检测方法需要昂贵的设备和熟练的技术人员。因此,蚕卵生产企业最常用的检测方法是在显微镜下观察是否存在多面体。但该方法准确度和灵敏度较低。蚕场、蚕卵生产企业和检疫部门迫切需要开发一种高灵敏度、高特异性、适用性的检测新技术。本研究将重组酶聚合酶扩增(RPA)技术与CRISPR/Cas13a系统相结合,成功建立了CRISPR/Cas13a BmNPV可视化检测技术。该技术基于微孔板横向、流动测试条和便携式荧光检测器。 30-45 min内,阳性标准质粒的检测灵敏度可达1拷贝/μL,BmNPV基因组的检测灵敏度可达1 fg/μL,具有较高的灵敏度。通过检测感染不同病原体的家蚕组织,我们确定CRISPR/Cas13a检测技术具有良好的特异性。综上所述,新建立的BmNPV核酸检测技术具有灵敏度高、特异性强、成本低、便于可视化等特点。可应用于现场检测和蚕卵质量监测系统。
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