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通过锌指结构域插入激活特定 DNA 位点的重组酶

Nature Biotechnology ( IF 33.1 ) Pub Date : 2024-01-31 , DOI: 10.1038/s41587-023-02121-y
Liliya Mukhametzyanova 1 , Lukas Theo Schmitt 1, 2 , Julia Torres-Rivera 1 , Teresa Rojo-Romanos 1, 2 , Felix Lansing 1, 2 , Maciej Paszkowski-Rogacz 1 , Heike Hollak 1, 2 , Melanie Brux 1 , Martina Augsburg 1 , Paul Martin Schneider 1, 2 , Frank Buchholz 1
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与核酸酶和其他编辑酶相比,重组酶作为基因组编辑工具具有几个潜在优势,但对其进行工程改造以有效重组预定 DNA 靶标的过程需要投入大量时间和劳动力。在这里,我们试图利用锌指 DNA 结合结构域 (ZFD) 通过开发融合来编程重组酶结合,其中 ZFD入重组酶编码序列。通过筛选杂交蛋白文库,我们优化了插入位点、接头长度、间距和 ZFD 方向,并生成了保持休眠状态的 Cre 型重组酶,除非插入融合的 ZFD 结合位于重组酶结合位点附近的靶位点。开发的融合将重组酶的靶向编辑效率提高了四倍并消除了哺乳动物细胞中可测量的脱靶活性。ZFD 依赖性活性可转移到具有松散特异性的重组酶上,为开发完全可编程的重组酶提供了手段。我们的工程化重组酶提供了改进的基因组编辑工具,具有更高的精度和效率。





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更新日期:2024-02-02
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