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用于鉴定初级细胞内药物结合蛋白的串联亲和纯化方法
ACS Chemical Biology ( IF 3.5 ) Pub Date : 2024-01-25 , DOI: 10.1021/acschembio.3c00570 Sehbanul Islam 1 , Jitendra Gour 2 , Thomas Beer 2 , Hsin-Yao Tang 2 , Joel Cassel 3 , Joseph M Salvino 2 , Luca Busino 1
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在药物发现领域，了解小分子药物如何与细胞成分相互作用至关重要。我们的研究引入了一种新的方法来发现主要药物靶点，使用T和亲和纯化来鉴定药物结合蛋白(TAP-DBP)。我们方法的核心是生成带有 FKBP12(F36V) 接头蛋白和 TurboID 酶的 FLAG 血凝素 (HA) 标记嵌合蛋白。药物分子与 FKBP12(F36V) 配体的缀合可以协调招募药物结合伴侣，有效地实现细胞内 TurboID 介导的生物素化。通过采用基于 FLAG 免疫沉淀和链霉亲和素下拉的串联亲和纯化方案以及质谱分析，TAP-DBP 可以精确识别药物主要结合伴侣。总的来说，这项研究引入了一种系统的、公正的方法来识别药物-蛋白质相互作用，有助于清楚地了解靶点参与和药物选择性，以推进药物在细胞中的作用模式。
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