当前位置:
X-MOL 学术
›
J. Am. Chem. Soc.
›
论文详情
Our official English website, www.x-mol.net, welcomes your feedback! (Note: you will need to create a separate account there.)
深入了解 tRNA 修饰酶 MnmE 和 MnmG 安装 5-羧甲基氨基甲基尿苷超修饰的机制
Journal of the American Chemical Society ( IF 14.4 ) Pub Date : 2023-12-05 , DOI: 10.1021/jacs.3c10182 Praneeth Bommisetti 1 , Vahe Bandarian 1
Affiliation
![]() |
进化上保守的细菌蛋白 MnmE 和 MnmG(及其在真核生物中的同源物)将 5-羧甲基氨基甲基 (cmnm 5 ) 或 5-牛磺酸甲基 (τm 5 ) 基团安装到几种 tRNA 物种的摆动尿苷上。大肠杆菌MnmE 结合鸟苷 5'-三磷酸 (GTP) 和亚甲基四氢叶酸 (CH 2 THF),而 MnmG 结合黄素腺嘌呤二核苷酸 (FAD) 和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH)。 MnmEG 与甘氨酸一起催化 cmnm 5的安装,该反应也需要 GTP 的水解。在这封信中,我们结合生化技术研究了 MnmEG 反应的关键步骤。我们展示了多种证据支持黄素亚胺 FADH[N 5 =CH 2 ] +作为 MnmEG 反应的中心中间体。使用合成的FADH[N 5 =CD 2 ] +类似物,明确证明了FAD在亚甲基从CH 2 THF转移到U 34的C5位置中的中间作用。此外,含有氘化黄素-亚胺中间体和替代亲核试剂(例如牛磺酸和氨)的 MnmEG 反应也导致了预期的 U 34修饰 tRNA 的形成,表明 FAD[N 5 =CH 2 ] +作为所有 MnmEG 的通用中间体同系物。此外,还鉴定出了对尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳稳定的RNA-蛋白质复合物。 涉及一系列核酸酶(RNase T1)和蛋白酶(胰蛋白酶)消化以及逆转录实验的研究表明,该复合物可能是非共价的。虽然保守的 MnmG 半胱氨酸 C47 和 C277 突变体被证明可以减少 FAD,但它们无法促进修饰的 tRNA 形成。总的来说,这项研究为 MnmEG 修饰 tRNA 的生化机制提供了重要的见解。
![](https://scdn.x-mol.com/jcss/images/paperTranslation.png)
"点击查看英文标题和摘要"