CRISPR/Cas9是一种强大的基因组编辑工具，适用于多种植物物种。然而，CRISPR/Cas9-核糖核蛋白（RNP）在油棕中的应用尚未见报道。本文以()为靶基因，通过评估不同量的Cas9和热应激的效果，评估了油棕中CRISPR/Cas9-RNP的特异性、效率和敏感性。设计了7种gRNA，与Cas9蛋白结合，形成三种RNPs复合物组合； RNP1/RNP2、RNP3/RNP4 和 RNP5/RNP6/RNP7。使用 RNP5/RNP6/RNP7 对 Cas9 的最佳量和热应激进行评估表明，40 µg Cas9 和 39°C 的热处理可将油棕原生质体中的基因组编辑效率提高至 95%。两种最佳条件的使用在用 RNP1/RNP2 和 RNP3/RNP4 转化的原生质体中产生了高达 63.6% 的靶向突变频率，而用 RNP5/RNP6/RNP7 组合转化的原生质体则高达 100%。在两到三个目标位点进行多位点诱变，以高频率发生片段去除高达 179 bp、69 bp 和 816 bp，从而产生编辑效率和 100% 的敲除分数 (KO)。总而言之，这项研究展示了油棕中一个有前景、高效且精确的非转基因 CRISPR/Cas9-RNPs 基因组编辑平台，该平台在其他转化顽固物种中也具有巨大的应用潜力。



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