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Mini crRNA介导的CRISPR/Cas12a系统(MCM-CRISPR/Cas12a)及其在RNA检测中的应用
Talanta ( IF 5.6 ) Pub Date : 2023-10-28 , DOI: 10.1016/j.talanta.2023.125350 Xiaolong Chen 1 , Chaowang Huang 1 , Jing Zhang 1 , Qiao Hu 1 , Dan Wang 1 , Qianyi You 1 , Yawen Guo 1 , Huaping Chen 1 , Jing Xu 1 , Mingdong Hu 2
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更新日期:2023-10-28
Talanta ( IF 5.6 ) Pub Date : 2023-10-28 , DOI: 10.1016/j.talanta.2023.125350 Xiaolong Chen 1 , Chaowang Huang 1 , Jing Zhang 1 , Qiao Hu 1 , Dan Wang 1 , Qianyi You 1 , Yawen Guo 1 , Huaping Chen 1 , Jing Xu 1 , Mingdong Hu 2
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一些非编码RNA在疾病的发生和发展过程中会异常表达,因此有必要开发能够特异性、灵敏地检测它们的分析方法。在典型的CRISPR/Cas12a系统中,需要一个能够识别单链或双链DNA的完整crRNA来激活其反式切割活性,这限制了其在RNA检测中的直接应用。在这里,我们前瞻性地发现,在典型的CRISPR/Cas12a系统中在合适的位点切割易化的crRNA并不会影响其反式切割活性,并且微型rRNA介导的CRISPR/Cas12a系统(MCM-CRISPR/Cas12a)正是基于此提出的。该系统可以检测 pM 水平的非编码 RNA(miRNA-21 为 10 pM)。为了扩展该系统的应用,我们将其与HCR和CHA结合建立了非编码RNA的检测平台。结果表明,该方法可以特异性检测到 fM 水平的 RNA(miRNA-21 为 2.5 fM,miR-128–3p 为 8.98 fM,lncRNA PACER 为 81.6 fM)。正常人血清中miRNA-21、miR-128-3p和lncRNA PACER的加标回收率在104.7%~109.4%之间,表明该方法具有良好的适用性。总的来说,该MCM-CRISPR/Cas12a系统进一步打破了典型CRISPR/Cas12a系统不能直接用于非编码RNA检测的局限性。此外,它与HCR和CHA的结合实现了非编码RNA的高灵敏检测。
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