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一个结合 2-吡啶甲醛探针和点击化学的 N terminomics 工具箱，用于分析蛋白酶特异性
Cell Chemical Biology ( IF 6.6 ) Pub Date : 2023-10-09 , DOI: 10.1016/j.chembiol.2023.09.009
Haley N Bridge 1 , William Leiter 2 , Clara L Frazier 1 , Amy M Weeks 3
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蛋白酶产生的 N 末端的蛋白质组学分析为蛋白酶的功能和特异性提供了关键见解。然而，目前的技术存在序列限制或需要专门的合成试剂来分离 N 端肽。在这里，我们介绍了一个 N 末端组学工具箱，它将使用 2-吡啶甲醛 （2PCA） 试剂的选择性 N 末端生物素化与化学可切割接头相结合，以实现蛋白质 N 末端的高效富集。通过将市售的炔烃改性 2PCA 与 Cu（I） 催化的叠氮化物-炔烃环加成反应 （CuAAC） 相结合，我们的策略消除了对 N 端探针进行化学合成的需要。使用这些试剂，我们开发了 PICS2 （用 2PCA 对切割位点进行蛋白质组学鉴定），以分析枯草杆菌蛋白酶/kexin 型前蛋白转化酶 （PCSK） 的特异性。我们还实施了 CHOPPER（使用可购买、可洗脱的试剂对蛋白酶底物进行化学富集）用于凋亡蛋白水解切割位点的全局测序。基于它们的广泛适用性和易于实施性，PICS2 和 CHOPPER 是促进我们对蛋白酶生物学理解的有用工具。
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