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使用 CRISPR-Cas12a 进行可编程 RNA 检测
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2023-09-05 , DOI: 10.1038/s41467-023-41006-1
Santosh R Rananaware 1 , Emma K Vesco 1, 2 , Grace M Shoemaker 1 , Swapnil S Anekar 1 , Luke Samuel W Sandoval 3 , Katelyn S Meister 1 , Nicolas C Macaluso 1 , Long T Nguyen 1 , Piyush K Jain 1, 4, 5
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Cas12a 是一种 CRISPR 相关蛋白复合物,具有切割 DNA 底物的固有能力,可用于诊断工具中识别 DNA 分子。我们证明了 Cas12a 的多个直向同源物在存在裂解激活剂的情况下激活反式裂解。具体而言,只要 PAM 近端种子区域具有 DNA 靶标,crRNA 的 PAM 远端区域即可识别 RNA 靶标。我们的方法,用于高度可访问的 RNA 分析的分割激活器 (SAHARA),只需提供与种子区域互补的短 DNA 序列即可检测皮摩尔浓度的 RNA,无需样品扩增、反转录或链置换。除了 RNA 检测之外,SAHARA 在点突变特异性方面优于野生型 CRISPR-Cas12a,并且可以通过不同的 PAM 近端种子 DNA 检测混合 crRNA/Cas12a 阵列中的多个 RNA 和 DNA 靶标。总之,SAHARA 是一个基于 Cas12a 的简单而强大的核酸检测平台,可以以多重方式应用,并有可能扩展到其他 CRISPR-Cas 酶。

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