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使用 LAMP 和 qPCR 检测家禽屠体中的沙门氏菌,并通过多重 qPCR 鉴定感兴趣的血清型
Brazilian Journal of Microbiology ( IF 2.1 ) Pub Date : 2023-08-16 , DOI: 10.1007/s42770-023-01095-y Evelyn Cristine da Silva 1 , Catarina Demarchi de Oliveira 2 , Lucas Franco Miranda Ribeiro 2 , Monique Ribeiro Tiba Casas 3 , Juliano Gonçalves Pereira 2 , Fábio Sossai Possebon 1, 2 , João Pessoa Araújo Junior 1
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沙门氏菌存在于家禽生产链中,是食品安全和动物健康方面的重大挑战。早期沙门氏菌检测是控制和预防这种病原体传播的主要工具之一。用于识别和区分沙门氏菌血清型的微生物分离和血清分型是费力、耗时且昂贵的过程。因此,分子诊断方法可以成为检测这种病原体的快速有效的替代方法。因此,本文的目的是标准化和评估环介导等温扩增 (LAMP) 与实时 PCR (qPCR) 的比较,用于检测沙门氏菌,并使用多重 qPCR 来同时鉴定和区分沙门氏菌。肠炎球菌, S .鼠伤寒杆菌, S 。白痢和S .鸡属。 LAMP、qPCR 和多重 qPCR 检测的特异性相当。评估了这三种技术对 16 种不同沙门氏菌血清型和 37 种感兴趣血清型菌株的特异性。确定了 LAMP、qPCR 和多重 qPCR 反应的检测限和效率。该技术应用于 33 个鸡尸体样本,并与传统微生物学结果进行比较以进行验证。结果,LAMP 对不同沙门氏菌血清型的检测具有特异性,但检测下限范围为 10 1至 10 4 CFU/反应。相比之下,qPCR 可以检测到更少的细胞(10 0至 10 2 CFU/反应),在检测中达到相同的特异性和更好的重复性。 用于鉴定不同血清型的 qPCR 多重检测也显示出良好的特异性,检测阈值在 10 1和 10 2 CFU/反应之间。家禽屠体分析获得的结果表明分子方法和传统微生物学获得的结果之间存在对应关系。因此,所提出的检测方法有望用于家禽屠体中沙门氏菌的诊断,已被证明比传统诊断技术更快、更有效,对家禽生产、动物和公共卫生具有极大的意义。
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