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表达 Rep 蛋白的诱导型 HEK293 AAV 包装细胞系
Molecular Therapy - Methods & Clinical Development ( IF 4.6 ) Pub Date : 2023-07-15 , DOI: 10.1016/j.omtm.2023.07.002 Lovro Jalšić 1, 2 , Viktoria Lytvyn 2 , Seyyed Mehdy Elahi 2 , Sabahudin Hrapovic 3 , Nasha Nassoury 2 , Parminder Singh Chahal 2 , Bruno Gaillet 1 , Rénald Gilbert 1, 2, 4
Molecular Therapy - Methods & Clinical Development ( IF 4.6 ) Pub Date : 2023-07-15 , DOI: 10.1016/j.omtm.2023.07.002 Lovro Jalšić 1, 2 , Viktoria Lytvyn 2 , Seyyed Mehdy Elahi 2 , Sabahudin Hrapovic 3 , Nasha Nassoury 2 , Parminder Singh Chahal 2 , Bruno Gaillet 1 , Rénald Gilbert 1, 2, 4
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用于大规模重组腺相关病毒 (rAAV) 生产的包装或生产细胞系一直难以创建，部分原因是 AAV 生产所需的 Rep 蛋白具有细胞抑制性质。最困难的挑战是使用 HEK293 亲本细胞创建 AAV 包装细胞系，由于 HEK293 细胞中关键转录激活剂的组成型表达，HEK293 亲本细胞是目前 rAAV 生产的最佳哺乳动物平台。使用悬浮液和无血清培养基适应HEK293SF，该HEK293SF携带通过添加cumate和香豆霉素诱导的基因表达调节系统，我们能够创建表达AAV包装细胞。这是通过仔细选择两种 AAV Rep 蛋白（Rep 40 和 68）、使用两个具有不同表达水平的诱导型启动子并通过慢病毒载体转导整合到细胞中来实现的。我们最好的三个克隆产生的 rAAV 滴度与通过标准三重质粒转染其亲代细胞获得的滴度相当。这些克隆在连续培养条件下可稳定长达 7 周。还在使用无血清悬浮培养的波生物反应器中以 1 L 规模验证了一个克隆的 rAAV 生产。
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更新日期：2023-07-15
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