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使用易错 PCR 定向进化具有改善热稳定性的胆固醇氧化酶
Biotechnology Letters ( IF 2.0 ) Pub Date : 2023-06-08 , DOI: 10.1007/s10529-023-03401-y
Saeed Ebrahimi Fana 1, 2 , Aliakbar Fazaeli 3 , Mahdi Aminian 1
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更新日期:2023-06-09
Biotechnology Letters ( IF 2.0 ) Pub Date : 2023-06-08 , DOI: 10.1007/s10529-023-03401-y
Saeed Ebrahimi Fana 1, 2 , Aliakbar Fazaeli 3 , Mahdi Aminian 1
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胆固醇氧化酶在工业上很重要,因为它经常用作食品和农业工业中的生物传感器以及胆固醇的测量。然而,大多数天然酶表现出较低的热稳定性,这限制了它们的应用。在这里,我们获得了色杆菌属的改良变种。DS1胆固醇氧化酶 (ChOS) 通过应用两种易错 PCR 形式(连续稀释和单步)的随机突变体库增强了热稳定性。野生型 ChOS 的最佳温度和 pH 值分别为 70 ℃ 和 7.5。最好的突变体 ChOS-M 获得了三个氨基酸取代(S112T、I240V 和 A500S),并且热稳定性(50°C 5 小时)增强了 30%。突变体的最适温度和pH值没有改变。与野生型相比,圆二色性表明突变体中没有显着的二级结构改变。这些发现表明,易错PCR是增强酶特性的有效方法,并为ChOS作为耐热酶在工业领域和临床诊断中的实际应用提供了平台。
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