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人类多谱系集落形成单位客观定量的测定优化

Experimental Hematology ( IF 2.5 ) Pub Date : 2023-06-02 , DOI: 10.1016/j.exphem.2023.05.007
Evrett N Thompson 1 , Maximillian J Carlino 2 , Vanessa M Scanlon 3 , H Leighton Grimes 4 , Diane S Krause 5
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集落形成单位 (CFU) 测定是造血研究中的强大工具,因为它们使研究人员能够对单个干细胞和祖细胞的谱系潜力进行功能测试。谱系潜力的测定对于确定和验证通过荧光激活细胞分选 (FACS) 等方法分离的祖细胞群的身份非常重要。然而,由于缺乏某些谱系输出所需的特定生长因子,目前的 CFU 测定方法在稳健测定具有分化骨髓、红细胞和巨核细胞谱系能力的多能祖细胞方面受到限制。此外,集落类型的手动计数是主观的,导致用户在基于集落和细胞形态的细胞类型评估方面存在差异。我们证明,将粒细胞集落刺激因子 (G-CSF)、巨噬细胞 (M)-CSF 和粒细胞-巨噬细胞 (GM)-CSF 添加到含有 IL-3、IL-6、SCF 的胶原基 MegaCult 培养基中、EPO 和 TPO 允许常见骨髓祖细胞分化为包含粒细胞 (G)、单核细胞 (M)、红细胞 (E) 和巨核细胞 (Mk) 细胞的预期比例的集落。此外,我们展示了一种使用原位免疫荧光 (IF) 与抗 CD66b、抗 CD14、抗 CD235a 和抗 CD41 分别检测 G、M、E 和 Mk 细胞的客观方法。 IF 染色的菌落可以在显微镜下或使用高通量显微镜进行单独分析。因此,我们对培养条件和检测读数方法的改进提高了骨髓 CFU 检测的准确性、重现性和通量。





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更新日期:2023-06-02
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