硝基还原酶（NTR）是缺氧肿瘤微环境中过度表达的酶，可作为临床试验中肿瘤诊断的特异性识别位点。因此，精确、即时地开发 NTR 活性探针具有重要意义。在这项工作中，基于具有4-animobenzyl 氨基甲酸酯基团的嘧啶衍生物的结构构建了NTR探针（ZJ）。 ZJ 通过细胞中的 NTR 识别表现出响应性“开启”双光子激发荧光，并且。在还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH) 存在下，ZJ 中的 4-硝基苄基氨基甲酸酯基团可被 NTR 还原为 4-氨基苯甲基氨基甲酸酯基团。由于其自焚特性，4-animobenzyl carbamate 会释放出嘧啶上的伯胺，同时 ZJ 的荧光信号恢复。这种响应性荧光开启过程最快可在 20 分钟内完成。通过可忽略的生物因素干扰以及对不同NTR类型的区分，进一步说明了ZJ对NTR活性传感的良好稳定性和特异性。 ZJ利用双光子荧光显微镜成功地可视化了缺氧癌细胞和斑马鱼中过表达的NTR分布，这证明了其在研究肿瘤缺氧微环境与癌症之间关系方面的潜在应用。



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