当前位置:
X-MOL 学术
›
Nat. Commun.
›
论文详情
Our official English website, www.x-mol.net, welcomes your
feedback! (Note: you will need to create a separate account there.)
通过荧光 bPNA 富含尿苷的内环标记进行细胞内 RNA 和 DNA 追踪
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2023-05-24 , DOI: 10.1038/s41467-023-38579-2
Yufeng Liang 1, 2 , Sydney Willey 2, 3, 4 , Yu-Chieh Chung 3 , Yi-Meng Lo 1, 2 , Shiqin Miao 1, 2 , Sarah Rundell 1, 2 , Li-Chun Tu 2, 3, 4 , Dennis Bong 1, 2
"点击查看英文标题和摘要"
更新日期:2023-05-24
Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2023-05-24 , DOI: 10.1038/s41467-023-38579-2
Yufeng Liang 1, 2 , Sydney Willey 2, 3, 4 , Yu-Chieh Chung 3 , Yi-Meng Lo 1, 2 , Shiqin Miao 1, 2 , Sarah Rundell 1, 2 , Li-Chun Tu 2, 3, 4 , Dennis Bong 1, 2
Affiliation
|
细胞内 RNA 荧光标记最广泛使用的方法是 MS2 标记,该方法通常依赖于使用针对安装在感兴趣的 RNA (ROI) 上的多个 RNA (MS2) 发夹结构的多个蛋白质标记。虽然蛋白质标签在细胞生物学实验室中有效且方便地应用,但它显着增加了结合 RNA 的质量,这可能会影响空间可及性和天然 RNA 生物学。我们之前已经证明,通过与 1 kD 双面肽核酸 (bPNA) 进行三重杂交,可以以最小的结构扰动靶向由 RNA 中的四个连续 UU 对 (8 nt) 组成的内部、遗传编码、富含尿苷的内部环 (URIL) 。用于 RNA 和 DNA 追踪的 URIL 靶向策略将避免使用繁琐的蛋白质融合标签,并最大限度地减少目标 RNA 的结构改变。在这里,我们证明细胞培养基中的 URIL 靶向荧光 bPNA 探针可以穿透细胞膜并有效标记固定细胞和活细胞中的 RNA 和 RNP。我们将这种方法称为荧光富含 U 内环 (FLURIL) 标记,通过使用带有 URIL 和 MS2 标记位点的 RNA 进行内部验证。值得注意的是,对活 U2OS 细胞中 CRISPR-dCas 标记的基因组位点的直接比较表明,FLURIL 标记的 gRNA 产生的位点的背景信号比用八个 MS2 发夹阵列修饰的向导 RNA 靶向的位点高出 7 倍。一起,

"点击查看英文标题和摘要"