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带有辣根过氧化物酶读数的酶级联用于人 Arginase-1 的高通量筛选和工程化
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2023-04-24 , DOI: 10.1021/acs.analchem.2c05429
Jaime Fernández De Santaella 1, 2, 3 , Jin Ren 1, 2 , Rosario Vanella 1, 2 , Michael A Nash 1, 2, 3, 4
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2023-04-24 , DOI: 10.1021/acs.analchem.2c05429
Jaime Fernández De Santaella 1, 2, 3 , Jin Ren 1, 2 , Rosario Vanella 1, 2 , Michael A Nash 1, 2, 3, 4
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我们报告了一种酶级联反应，带有基于辣根过氧化物酶的读数，用于筛选人精氨酸酶-1 (hArg1) 活性。我们将四种酶 hArg1、鸟氨酸脱羧酶、腐胺氧化酶和辣根过氧化物酶结合在一个反应级联中，该反应级联产生响应 hArg1 活性的比色或荧光信号，并使用该级联将野生型和变体 hArg1 序列作为可溶性酶进行分析并显示在大肠杆菌表面. 我们筛选了一个包含 13 个成员的 hArg1 文库，涵盖了改变催化残基 D128 和 H141 周围静电环境的突变，并确定了 R21E 变体，与野生型相比催化周转率提高了 13%。我们具有连续动力学读数的可扩展一锅单步精氨酸酶测定适用于精氨酸酶文库的高通量筛选和定向进化，以及测试候选药物的精氨酸酶抑制作用。
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更新日期：2023-04-24
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