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打破教条:Hoechst 33342 实时高通量活细胞成像

Advanced Healthcare Materials ( IF 10.0 ) Pub Date : 2023-03-19 , DOI: 10.1002/adhm.202300230
Heiko Fuchs 1 , Kirsten Jahn 2 , Xiaonan Hu 1 , Roland Meister 1 , Maximilian Binter 1 , Carsten Framme 1
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自动化高通量活细胞成像 (LCI) 可在体外研究物质对细胞的影响。通常,通过相差成像分析细胞数量,这仅对少数细胞类型可靠。因此,需要一种准确的细胞计数方法,例如在 LCI 之前用 Hoechst 33342 对细胞核进行染色。然而,自 1980 年代中期以来,存在一种教条,即 Hoechst 只能用于终点分析,因为它具有细胞毒性特性和激发光的潜在光毒性作用。由于显微相机的灵敏度已显着提高,本研究调查了这一教条是否仍然合理。因此,使用 4× 物镜优化暴露参数,并评估所需的最低 Hoechst 浓度,允许在 5 天内以 30 分钟的间隔进行 LCI。值得注意的是,10-9m ×仅 57 的 Hoechst 浓度显着抑制增殖,从而损害细胞活力。然而,可以确定 7 × 10-9 和 28 × 10-9m 之间的 Hoechst 浓度,这既不影响细胞毒性,也不会影响细胞活力、增殖或信号通路。该方法可适用于常规倒置荧光显微镜,并允许确定例如物质的细胞毒性或转导效率,其优点是可以在任何所需的时间点重复分析。




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更新日期:2023-03-19
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