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全面分离细胞外囊泡和纳米颗粒
Nature Protocols ( IF 13.1 ) Pub Date : 2023-03-13 , DOI: 10.1038/s41596-023-00811-0
Qin Zhang 1 , Dennis K Jeppesen 1 , James N Higginbotham 1 , Jeffrey L Franklin 1, 2 , Robert J Coffey 1, 2
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人们越来越认识到细胞外囊泡 (EV) 的异质性。此外,最近发现了两种非囊泡细胞外纳米颗粒 (NVEP),即外显子和超异构体,它们富集在以前归因于 EV 的许多货物中。EV 领域主要集中在 EV 隔离和表征上,而对 NVEP 的研究有限。在这个关头,拥有强大而可靠的方法来区分不同的 EV 和 NVEP 群体以将货物分配给正确的承运人至关重要。在这里,我们提供了一个全面的分步方案,用于从同一起始材料中连续分离大大小 EV、非囊泡组分、外显异体和超异体。我们详细描述了使用差速超速离心、过滤、浓缩和高分辨率密度梯度分馏来获得不同 EV 和 NVEP 群体的纯化级分。该方案允许将感兴趣的生物分子分配到其特定的细胞外区室并富集。与其他分离方法相比,我们的方案具有独特的优势,包括高纯度和可重复性,并且需要最少的专业知识。该方案可应用于从细胞培养基和人血浆中纯化 EV 和 NVEP,需要 ~72 小时才能完成。采用该方案将有助于转化研究人员确定许多人类疾病的潜在循环生物标志物和治疗靶点,并使基础科学家能够更好地了解 EV 和 NVEP 的生物发生和功能。总体而言,该协议将允许那些对分离 EV 和细胞外颗粒感兴趣的人推进科学探究,以回答该领域的悬而未决的问题。
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