三氯生 [5-chloro-2-(2,4-dichlorophenoxy) phenol, TCS] 是许多个人护理和保健产品中常见的抗菌添加剂，经常在人体血液和尿液中检测到。因此，近年来它被认为是一种新兴的具有潜在毒性的污染物。长期暴露于 TCS 已被建议发挥内分泌干扰作用，并促进肝纤维化和肿瘤发生。本研究旨在阐明 TCS 在起始阶段肝毒性作用的潜在细胞和分子机制。C57BL/6 小鼠暴露于不同剂量的 TCS 2 周，并通过各种测量评估器官毒性，包括全血细胞计数、组织学分析和 TCS 定量。然后对 TCS 或模拟处理的小鼠肝脏进行单细胞 RNA 测序 (scRNA-seq)，以描述 TCS 诱导的肝毒性。从差异基因表达、转录因子 (TF) 调控网络、伪时间轨迹和细胞通讯等不同方面分析获得的单细胞转录组数据，以系统地剖析 TCS 暴露后的分子和细胞事件。为了验证 TCS 诱导的肝纤维化，通过蛋白质印迹、免疫荧光、马松三色和天狼星红染色检查了关键纤维化蛋白的表达水平。此外，以正常肝细胞MIHA和肝星状细胞LX-2为体外细胞模型，通过免疫学、蛋白质组学和代谢组学技术，通过实验验证TCS的作用。我们建立了一个相对短期的 TCS 暴露小鼠模型，发现 TCS 主要积累在肝脏中。在 TCS 处理组和对照组的肝脏上进行的 scRNA-seq 分析了属于 13 种主要细胞类型的 > 76,000 个细胞的基因表达。在这些类型中，肝细胞和肝星状细胞 (HSC) 在 TCS 治疗组中显着增加。我们发现 TCS 促进了肝细胞的纤维化相关增殖，其中 Gata2 和 Mef2c 是驱动转录因子的关键。我们的数据还表明 TCS 诱导了 HSC 的增殖和活化，这在肝组织和细胞模型中都得到了实验验证。此外，其他变化包括内皮细胞的功能障碍和毛细血管化，B浆细胞纤维化特征的增加，和 M2 表型偏斜的巨噬细胞，也从 scRNA-seq 分析中推断出来，这些变化可能有助于肝纤维化的进展。最后，确定了参与细胞通讯的关键差异配体-受体对，并证实了 GAS6_AXL 相互作用介导的细胞通讯在促进肝纤维化中的作用。TCS调节肝脏中几种特定细胞类型（包括肝细胞、HSC、内皮细胞、B细胞、Kupffer细胞和肝包膜巨噬细胞）的细胞活动和命运，并调节这些细胞之间的配体-受体相互作用，从而促进增殖和 HSC 的激活，导致肝纤维化。全面的，



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