5,7-Dihydroxy-4-methylcoumarin (D4M) is attributed to free radical scavenging effects, with wide application for anti-oxidation. This work aimed to assess D4M's impact on cisplatin-induced ototoxicity. The cell viability was estimated with CCK-8 assay. Apoptosis was detected by the Annexin V-FITC and PI assay. The reactive oxygen species (ROS) level was determined by MitoSOX-Red and CellROX-Green probes. Mitochondrial membrane potential was analyzed with TMRM staining. Immunofluorescence was utilized for hair cells and spiral ganglion neuron detection. Apoptosis-associated proteins were assessed by cleaved caspase-3 and TUNEL staining. These results showed that D4M pretreatment protected hair cells from cisplatin-induced damage, increased cell viability, and decreased apoptosis in House Ear Institute-Organ of Corti1 (HEI-OC1) cells and neonatal mouse cochlear explants. D4M significantly inhibited cisplatin-induced mitochondrial apoptosis and reduced ROS accumulation. In addition, the protective effect of D4M on cisplatin-induced ototoxicity was also confirmed in cochlear hair cells and spiral ganglion neurons in neonatal mice. Mechanistic studies showed that D4M markedly downregulated p-JNK and elevated the expression ratio of p-FoxO1/FoxO1, thereby reducing cisplatin-induced caspase-dependent apoptosis. Meanwhile, D4M-related protection of HEI-OC1 cells was significantly blunted by JNK signaling induction with anisomycin. This study supports the possibility that D4M may be used as a new compound to prevent cisplatin-related hearing loss.

5,7-二羟基-4-甲基香豆素 (D4M) 具有清除自由基的作用，广泛应用于抗氧化。这项工作旨在评估 D4M 对顺铂诱导的耳毒性的影响。用CCK-8测定估计细胞活力。通过膜联蛋白 V-FITC 和 PI 测定法检测细胞凋亡。活性氧 (ROS) 水平由 MitoSOX-Red 和 CellROX-Green 探针测定。用 TMRM 染色分析线粒体膜电位。免疫荧光用于毛细胞和螺旋神经节神经元检测。通过裂解的 caspase-3 和 TUNEL 染色评估细胞凋亡相关蛋白。这些结果表明，D4M 预处理可保护毛细胞免受顺铂诱导的损伤，增加细胞活力，Corti1 (HEI-OC1) 细胞和新生小鼠耳蜗外植体的细胞凋亡减少。D4M 显着抑制顺铂诱导的线粒体凋亡并减少 ROS 积累。此外，还在新生小鼠的耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元中证实了 D4M 对顺铂诱导的耳毒性的保护作用。机制研究表明，D4M 显着下调 p-JNK 并提高 p-FoxO1/FoxO1 的表达比，从而减少顺铂诱导的 caspase 依赖性细胞凋亡。同时，用茴香霉素诱导 JNK 信号转导显着削弱了 HEI-OC1 细胞的 D4M 相关保护作用。该研究支持 D4M 可用作预防顺铂相关听力损失的新化合物的可能性。D4M 显着抑制顺铂诱导的线粒体凋亡并减少 ROS 积累。此外，还在新生小鼠的耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元中证实了 D4M 对顺铂诱导的耳毒性的保护作用。机制研究表明，D4M 显着下调 p-JNK 并提高 p-FoxO1/FoxO1 的表达比，从而减少顺铂诱导的 caspase 依赖性细胞凋亡。同时，用茴香霉素诱导 JNK 信号转导显着削弱了 HEI-OC1 细胞的 D4M 相关保护作用。该研究支持 D4M 可用作预防顺铂相关听力损失的新化合物的可能性。D4M 显着抑制顺铂诱导的线粒体凋亡并减少 ROS 积累。此外，还在新生小鼠的耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元中证实了 D4M 对顺铂诱导的耳毒性的保护作用。机制研究表明，D4M 显着下调 p-JNK 并提高 p-FoxO1/FoxO1 的表达比，从而减少顺铂诱导的 caspase 依赖性细胞凋亡。同时，用茴香霉素诱导 JNK 信号转导显着削弱了 HEI-OC1 细胞的 D4M 相关保护作用。该研究支持 D4M 可用作预防顺铂相关听力损失的新化合物的可能性。D4M 对顺铂诱导的耳毒性的保护作用也在新生小鼠的耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元中得到证实。机制研究表明，D4M 显着下调 p-JNK 并提高 p-FoxO1/FoxO1 的表达比，从而减少顺铂诱导的 caspase 依赖性细胞凋亡。同时，用茴香霉素诱导 JNK 信号转导显着削弱了 HEI-OC1 细胞的 D4M 相关保护作用。该研究支持 D4M 可用作预防顺铂相关听力损失的新化合物的可能性。D4M 对顺铂诱导的耳毒性的保护作用也在新生小鼠的耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元中得到证实。机制研究表明，D4M 显着下调 p-JNK 并提高 p-FoxO1/FoxO1 的表达比，从而减少顺铂诱导的 caspase 依赖性细胞凋亡。同时，用茴香霉素诱导 JNK 信号转导显着削弱了 HEI-OC1 细胞的 D4M 相关保护作用。该研究支持 D4M 可用作预防顺铂相关听力损失的新化合物的可能性。HEI-OC1 细胞的 D4M 相关保护被茴香霉素诱导的 JNK 信号传导显着减弱。该研究支持 D4M 可用作预防顺铂相关听力损失的新化合物的可能性。HEI-OC1 细胞的 D4M 相关保护被茴香霉素诱导的 JNK 信号传导显着减弱。该研究支持 D4M 可用作预防顺铂相关听力损失的新化合物的可能性。