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一种工程 T7 RNA 聚合酶,可产生不含免疫刺激副产物的 mRNA
Nature Biotechnology ( IF 33.1 ) Pub Date : 2022-11-10 , DOI: 10.1038/s41587-022-01525-6 Athanasios Dousis 1, 2 , Kanchana Ravichandran 1 , Elissa M Hobert 1, 3 , Melissa J Moore 1 , Amy E Rabideau 1
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体外转录 (IVT) 是一种以 DNA 为模板的过程,用于合成长 RNA 转录物,包括信使 RNA (mRNA)。对于许多研究和商业应用,mRNA 的 IVT 通常使用噬菌体 T7 RNA 聚合酶 (T7 RNAP) 进行,因为它能够产生高保真度的全长 RNA 转录本;然而,T7 RNAP 也会产生免疫刺激副产物,例如影响蛋白质表达的双链 RNA。此类副产物需要使用反相高效液相色谱等方法进行复杂的纯化过程,才能产生安全有效的基于 mRNA 的药物。为了最大限度地减少下游纯化过程的需要,我们通过合理的计算设计了 T7 RNAP 的双突变体,与野生型 T7 RNAP 相比,它在 IVT 期间产生的免疫刺激性 RNA 显着减少。与野生型 T7 RNAP 相比,所得突变体可以简化生产过程,具有相似的 mRNA 效力、更低的免疫刺激含量和更快的生产时间。在此,我们描述了这种改进的 T7 RNAP 变体的计算设计和开发。
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