TBK1 抑制剂通过抑制 p62/SQSTM1 磷酸化来提高转染效率,Genes to Cells

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TBK1 抑制剂通过抑制 p62/SQSTM1 磷酸化来提高转染效率
Genes to Cells ( IF 1.3 ) Pub Date : 2022-10-25 , DOI: 10.1111/gtc.12987
Megumi Tsuchiya ₁ , Weixia Kong ₁ , Yasushi Hiraoka ₁ , Tokuko Haraguchi ₁ , Hidesato Ogawa ₁

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DNA 转染是生命科学中的一项基本技术。非病毒转染试剂广泛用于基础科学中的转染。然而，低转染效率是某些细胞类型的问题。这种低效率主要归因于 p62 依赖性选择性自噬对转染 DNA 的细胞内降解，特别是在 S403 残基处磷酸化的 p62 (p62-S403-P)。为了实现高效的 DNA 转染，我们专注于生成 p62-S403-P 的磷酸化过程，并研究了抑制该过程是否会影响转染效率。磷酸化 p62 的激酶之一是 TBK1。通过基因组编辑消除小鼠胚胎成纤维细胞中的 TBK1 基因导致 p62-S405-P（相当于人 S403-P）显着减少或丢失并提高转染效率，这表明 TBK1 是一种主要的激酶，可在 S403 位点磷酸化 p62。因此，TBK1 是提高转染效率的药物治疗的可行靶点。当细胞用以下 TBK1 抑制剂 BX795、MRT67307 或氨来消素之一处理时，转染效率得到提高。当两种抑制剂联合使用时，这种效果会得到协同改善。我们的结果表明 TBK1 抑制剂通过抑制 p62 磷酸化来提高转染效率。TBK1 是药物治疗提高转染效率的可行靶标。当细胞用以下 TBK1 抑制剂 BX795、MRT67307 或氨来消素之一处理时，转染效率得到提高。当两种抑制剂联合使用时，这种效果会得到协同改善。我们的结果表明 TBK1 抑制剂通过抑制 p62 磷酸化来提高转染效率。TBK1 是药物治疗提高转染效率的可行靶标。当细胞用以下 TBK1 抑制剂 BX795、MRT67307 或氨来消素之一处理时，转染效率得到提高。当两种抑制剂联合使用时，这种效果会得到协同改善。我们的结果表明 TBK1 抑制剂通过抑制 p62 磷酸化来提高转染效率。

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TBK1 inhibitors enhance transfection efficiency by suppressing p62/SQSTM1 phosphorylation

DNA transfection is an essential technique in the life sciences. Non-viral transfection reagents are widely used for transfection in basic science. However, low transfection efficiency is a problem in some cell types. This low efficiency can be primarily attributed to the intracellular degradation of transfected DNA by p62-dependent selective autophagy, specifically by p62 phosphorylated at the S403 residue (p62-S403-P). To achieve efficient DNA transfection, we focused on a phosphorylation process that generates p62-S403-P and investigated whether inhibition of this process affects transfection efficiency. One of the kinases that phosphorylate p62 is TBK1. The TBK1 gene depletion in murine embryonic fibroblast cells by genome editing caused a significant reduction or loss of p62-S405-P (equivalent to human S403-P) and enhanced transfection efficiency, suggesting that TBK1 is a major kinase that phosphorylates p62 at S403. Therefore, TBK1 is a viable target for drug treatment to increase transfection efficiency. Transfection efficiency was enhanced when cells were treated with one of the following TBK1 inhibitors BX795, MRT67307, or amlexanox. This effect was synergistically improved when the two inhibitors were used in combination. Our results indicate that TBK1 inhibitors enhanced transfection efficiency by suppressing p62 phosphorylation.

更新日期：2022-10-25

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