Epithelial Cell Adhesion Molecule (EpCAM) is overexpressed in a variety of cancers such as colon, stomach, pancreas, and prostate adenocarcinomas. Inhibition of EpCAM is considered as a potential target for cancer therapy. In current study, anti-EpCAM immunotoxin (α-EpCAM IT) was developed using genetic fusion of α-EpCAM single domain antibody (nanobody) (α-EpCAM Nb) to truncated form of diphtheria toxin. The expression of recombinant α-EpCAM IT was induced by Isopropyl β-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG) and confirmed by SDS-PAGE and western blot. Recombinant α-EpCAM IT was purified from the inclusion bodies and refolded using urea gradient procedure. The cytotoxicity and apoptosis activity of α-EpCAM IT on EpCAM over-expressing (MCF7), low-expressing (HEK293), and no-expressing (HUVEC) cells were evaluated by 3–4,5-Dimethylthiazol-2-yl (MTT) assay and annexin V-FITC-PI assay as well. In addition, anti-tumor activity of α-EpCAM IT was evaluated on nude mice bearing MCF7 tumor cells. Results showed success expression and purification of α-EpCAM IT. The α-EpCAM IT showed time and dose-dependent anti-proliferative activity on MCF-7 cells. However, α-EpCAM IT did not show any anti-proliferative activity on HEK293 and HUVEC cells as well. In addition, the annexin V-FITC-PI assay results showed that α-EpCAM IT significantly increased apoptotic rate in MCF-7 cells with no effect on HEK293 and HUVEC as well. Moreover, α-EpCAM IT significantly reduced tumor size in vivo study. The achieved results indicate the potential of designing α-EpCAM IT as a novel therapeutic for cancer therapy.

上皮细胞粘附分子 (EpCAM) 在多种癌症中过度表达，例如结肠癌、胃癌、胰腺癌和前列腺癌。EpCAM 的抑制被认为是癌症治疗的潜在目标。在目前的研究中，使用 α-EpCAM 单域抗体（纳米抗体）（α-EpCAM Nb）与截短形式的白喉毒素的基因融合开发了抗 EpCAM 免疫毒素（α-EpCAM IT）。重组 α-EpCAM IT 的表达由异丙基 β-d-1-硫代吡喃半乳糖苷 (IPTG) 诱导，并通过 SDS-PAGE 和蛋白质印迹证实。从包涵体中纯化重组 α-EpCAM IT，并使用尿素梯度程序重新折叠。α-EpCAM IT 对 EpCAM 过表达 (MCF7)、低表达 (HEK293) 和无表达 (HUVEC) 细胞的细胞毒性和凋亡活性由 3-4 评估，5-二甲基噻唑-2-基 (MTT) 测定和膜联蛋白 V-FITC-PI 测定也是如此。此外，α-EpCAM IT 的抗肿瘤活性在携带 MCF7 肿瘤细胞的裸鼠上进行了评估。结果表明 α-EpCAM IT 的成功表达和纯化。α-EpCAM IT 显示出对 MCF-7 细胞的时间和剂量依赖性抗增殖活性。然而，α-EpCAM IT 也没有显示出对 HEK293 和 HUVEC 细胞的任何抗增殖活性。此外，膜联蛋白 V-FITC-PI 检测结果表明，α-EpCAM IT 显着增加了 MCF-7 细胞的凋亡率，而对 HEK293 和 HUVEC 也没有影响。此外，α-EpCAM IT 在体内研究中显着减小了肿瘤大小。取得的结果表明将 α-EpCAM IT 设计为癌症治疗的新型疗法的潜力。在携带 MCF7 肿瘤细胞的裸鼠上评估 α-EpCAM IT 的抗肿瘤活性。结果表明 α-EpCAM IT 的成功表达和纯化。α-EpCAM IT 显示出对 MCF-7 细胞的时间和剂量依赖性抗增殖活性。然而，α-EpCAM IT 也没有显示出对 HEK293 和 HUVEC 细胞的任何抗增殖活性。此外，膜联蛋白 V-FITC-PI 检测结果表明，α-EpCAM IT 显着增加了 MCF-7 细胞的凋亡率，而对 HEK293 和 HUVEC 也没有影响。此外，α-EpCAM IT 在体内研究中显着减小了肿瘤大小。取得的结果表明将 α-EpCAM IT 设计为癌症治疗的新型疗法的潜力。在携带 MCF7 肿瘤细胞的裸鼠上评估 α-EpCAM IT 的抗肿瘤活性。结果表明 α-EpCAM IT 的成功表达和纯化。α-EpCAM IT 显示出对 MCF-7 细胞的时间和剂量依赖性抗增殖活性。然而，α-EpCAM IT 也没有显示出对 HEK293 和 HUVEC 细胞的任何抗增殖活性。此外，膜联蛋白 V-FITC-PI 检测结果表明，α-EpCAM IT 显着增加了 MCF-7 细胞的凋亡率，而对 HEK293 和 HUVEC 也没有影响。此外，α-EpCAM IT 在体内研究中显着减小了肿瘤大小。取得的结果表明将 α-EpCAM IT 设计为癌症治疗的新型疗法的潜力。α-EpCAM IT 显示出对 MCF-7 细胞的时间和剂量依赖性抗增殖活性。然而，α-EpCAM IT 也没有显示出对 HEK293 和 HUVEC 细胞的任何抗增殖活性。此外，膜联蛋白 V-FITC-PI 检测结果表明，α-EpCAM IT 显着增加了 MCF-7 细胞的凋亡率，而对 HEK293 和 HUVEC 也没有影响。此外，α-EpCAM IT 在体内研究中显着减小了肿瘤大小。取得的结果表明将 α-EpCAM IT 设计为癌症治疗的新型疗法的潜力。α-EpCAM IT 显示出对 MCF-7 细胞的时间和剂量依赖性抗增殖活性。然而，α-EpCAM IT 也没有显示出对 HEK293 和 HUVEC 细胞的任何抗增殖活性。此外，膜联蛋白 V-FITC-PI 检测结果表明，α-EpCAM IT 显着增加了 MCF-7 细胞的凋亡率，而对 HEK293 和 HUVEC 也没有影响。此外，α-EpCAM IT 在体内研究中显着减小了肿瘤大小。取得的结果表明将 α-EpCAM IT 设计为癌症治疗的新型疗法的潜力。此外，α-EpCAM IT 在体内研究中显着减小了肿瘤大小。取得的结果表明将 α-EpCAM IT 设计为癌症治疗的新型疗法的潜力。此外，α-EpCAM IT 在体内研究中显着减小了肿瘤大小。取得的结果表明将 α-EpCAM IT 设计为癌症治疗的新型疗法的潜力。