Cellular responses to stress generally lead to the activation of the endoplasmic reticulum-associated protein degradation (ERAD) pathway. Several lines of study support that ERAD may be playing a proviral role during flaviviral infection. A key host factor in ERAD is the valosin-containing protein (VCP), an ATPase which ushers ubiquitin-tagged proteins to degradation by the proteasome. VCP exhibits different proviral activities, such as engaging in the biogenesis of viral replication organelles and facilitating flavivirus genome uncoating after the viral particle entry. To investigate the possible antiviral value of drugs targeting VCP, we tested two inhibitors: eeyarestatin I (EEY) and xanthohumol (XAN). Both compounds were highly effective in suppressing Zika virus (ZIKV) and Usutu virus (USUV) replication during infection in cell culture. Further analysis revealed an unexpected virucidal activity for EEY, but not for XAN. Preincubation of ZIKV or USUV with EEY before inoculation to cells resulted in significant decreases in infectivity in a dose- and time-dependent manner. Viral genomes in samples previously treated with EEY were more sensitive to propidium monoazide, an intercalating agent, with 10- to 100-fold decreases observed in viral RNA levels, supporting that EEY affects viral particle integrity. Altogether, these results support that EEY is a strong virucide against two unrelated flaviviruses, encouraging further studies to investigate its potential use as a broad-acting drug or the development of improved derivatives in the treatment of flaviviral infection.

细胞对压力的反应通常会激活内质网相关蛋白降解 (ERAD) 通路。多项研究支持 ERAD 可能在黄病毒感染期间发挥前病毒作用。ERAD 中的一个关键宿主因子是含缬乐肽的蛋白质 (VCP)，这是一种 ATP 酶，可引导泛素标记的蛋白质被蛋白酶体降解。VCP 表现出不同的前病毒活性，例如参与病毒复制细胞器的生物发生和在病毒颗粒进入后促进黄病毒基因组脱壳。为了研究靶向 VCP 的药物可能的抗病毒价值，我们测试了两种抑制剂：eeyarestatin I (EEY) 和黄腐酚 (XAN)。这两种化合物在细胞培养感染过程中都能非常有效地抑制寨卡病毒 (ZIKV) 和乌苏图病毒 (USUV) 的复制。进一步的分析揭示了 EEY 的意外杀病毒活性，但 XAN 则不然。在接种到细胞之前，ZIKV 或 USUV 与 EEY 的预孵育导致感染性以剂量和时间依赖性方式显着降低。先前用 EEY 处理过的样本中的病毒基因组对单叠氮化丙啶（一种嵌入剂）更敏感，观察到病毒 RNA 水平降低 10 到 100 倍，支持 EEY 影响病毒颗粒的完整性。总之，这些结果支持 EEY 是一种针对两种不相关的黄病毒的强杀病毒剂，鼓励进一步研究以调查其作为广谱药物的潜在用途或开发改进的衍生物治疗黄病毒感染。在接种到细胞之前，ZIKV 或 USUV 与 EEY 的预孵育导致感染性以剂量和时间依赖性方式显着降低。先前用 EEY 处理过的样本中的病毒基因组对单叠氮化丙啶（一种嵌入剂）更敏感，观察到病毒 RNA 水平降低 10 到 100 倍，支持 EEY 影响病毒颗粒的完整性。总之，这些结果支持 EEY 是一种针对两种不相关的黄病毒的强杀病毒剂，鼓励进一步研究以调查其作为广谱药物的潜在用途或开发改进的衍生物治疗黄病毒感染。在接种到细胞之前，ZIKV 或 USUV 与 EEY 的预孵育导致感染性以剂量和时间依赖性方式显着降低。先前用 EEY 处理过的样本中的病毒基因组对单叠氮化丙啶（一种嵌入剂）更敏感，观察到病毒 RNA 水平降低 10 到 100 倍，支持 EEY 影响病毒颗粒的完整性。总之，这些结果支持 EEY 是一种针对两种不相关的黄病毒的强杀病毒剂，鼓励进一步研究以调查其作为广谱药物的潜在用途或开发改进的衍生物治疗黄病毒感染。先前用 EEY 处理过的样本中的病毒基因组对单叠氮化丙啶（一种嵌入剂）更敏感，观察到病毒 RNA 水平降低 10 到 100 倍，支持 EEY 影响病毒颗粒的完整性。总而言之，这些结果支持 EEY 是一种针对两种不相关的黄病毒的强杀病毒剂，鼓励进一步研究以调查其作为广谱药物的潜在用途或开发改进的衍生物治疗黄病毒感染。先前用 EEY 处理过的样本中的病毒基因组对单叠氮化丙啶（一种嵌入剂）更敏感，观察到病毒 RNA 水平降低 10 到 100 倍，支持 EEY 影响病毒颗粒的完整性。总之，这些结果支持 EEY 是一种针对两种不相关的黄病毒的强杀病毒剂，鼓励进一步研究以调查其作为广谱药物的潜在用途或开发改进的衍生物治疗黄病毒感染。