当前位置：
X-MOL 学术
›
Anal. Chem.
›
论文详情
Our official English website, www.x-mol.net, welcomes your
feedback! (Note: you will need to create a separate account there.)
Highly Sensitive Serum Protein Analysis Using Magnetic Bead-Based Proximity Extension Assay
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2022-08-30 , DOI: 10.1021/acs.analchem.2c02684 Pengfei Zhang 1 , Jiumei Hu 2 , Joon Soo Park 1 , Kuangwen Hsieh 2 , Liben Chen 2 , Alan Mao 1 , Tza-Huei Wang 1, 2, 3
Analytical Chemistry ( IF 6.7 ) Pub Date : 2022-08-30 , DOI: 10.1021/acs.analchem.2c02684 Pengfei Zhang 1 , Jiumei Hu 2 , Joon Soo Park 1 , Kuangwen Hsieh 2 , Liben Chen 2 , Alan Mao 1 , Tza-Huei Wang 1, 2, 3
Affiliation
|
Many protein biomarkers are present in biofluids at a very low level but may play critical roles in important biological processes. The fact that these low-abundance proteins remain largely unexplored underscores the importance of developing new tools for highly sensitive protein detection. Although digital enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) has demonstrated ultrahigh sensitivity compared with conventional ELISA, the requirement of specialized instruments limits the accessibility and prevents the widespread implementation. On the other hand, proximity ligation assays (PLA) and proximity extension assays (PEA) show sensitive and specific protein detection using regular laboratory setups, but their sensitivity needs to be further improved to match digital ELISA. To achieve highly sensitive protein detection with minimal accessibility limitation, we develop a magnetic bead-based PEA (magPEA), which posts triple epitope recognition requirement and enables extensive washing for improved sensitivity and enhanced specificity. We demonstrate that the incorporation of magnetic beads into PEA workflow facilitates orders of magnitude sensitivity improvement compared with conventional ELISA, homogeneous PEA, and solid-phase PLA and achieves limits of detection close to that of digital ELISA when using IL-6, IL-8, and GM-CSF as validation. Our magPEA provides a simple approach for highly sensitive protein detection that can be readily implemented to other laboratories and will thus ultimately accelerate the study of the low abundance protein biomarkers in the future.
中文翻译：
使用基于磁珠的邻近延伸测定法进行高灵敏度血清蛋白分析
许多蛋白质生物标志物以非常低的水平存在于生物流体中，但可能在重要的生物过程中发挥关键作用。这些低丰度蛋白质在很大程度上仍未被探索的事实强调了开发用于高灵敏度蛋白质检测的新工具的重要性。尽管数字酶联免疫吸附试验 (ELISA) 与传统的 ELISA 相比具有超高的灵敏度，但对专用仪器的要求限制了可及性并阻碍了广泛实施。另一方面，邻近连接分析 (PLA) 和邻近延伸分析 (PEA) 使用常规实验室设置显示出灵敏和特异性的蛋白质检测，但它们的灵敏度需要进一步提高以匹配数字 ELISA。为了以最小的可访问性限制实现高灵敏度的蛋白质检测，我们开发了一种基于磁珠的 PEA (magPEA)，它满足三重表位识别要求，并且能够进行广泛的洗涤以提高灵敏度和增强特异性。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。它提出了三重表位识别要求，并能够进行广泛的洗涤以提高灵敏度和特异性。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。它提出了三重表位识别要求，并能够进行广泛的洗涤以提高灵敏度和特异性。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。
更新日期：2022-08-30
中文翻译：
使用基于磁珠的邻近延伸测定法进行高灵敏度血清蛋白分析
许多蛋白质生物标志物以非常低的水平存在于生物流体中，但可能在重要的生物过程中发挥关键作用。这些低丰度蛋白质在很大程度上仍未被探索的事实强调了开发用于高灵敏度蛋白质检测的新工具的重要性。尽管数字酶联免疫吸附试验 (ELISA) 与传统的 ELISA 相比具有超高的灵敏度，但对专用仪器的要求限制了可及性并阻碍了广泛实施。另一方面，邻近连接分析 (PLA) 和邻近延伸分析 (PEA) 使用常规实验室设置显示出灵敏和特异性的蛋白质检测，但它们的灵敏度需要进一步提高以匹配数字 ELISA。为了以最小的可访问性限制实现高灵敏度的蛋白质检测，我们开发了一种基于磁珠的 PEA (magPEA)，它满足三重表位识别要求，并且能够进行广泛的洗涤以提高灵敏度和增强特异性。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。它提出了三重表位识别要求，并能够进行广泛的洗涤以提高灵敏度和特异性。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。它提出了三重表位识别要求，并能够进行广泛的洗涤以提高灵敏度和特异性。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。我们证明，与传统 ELISA、均质 PEA 和固相 PLA 相比，将磁珠纳入 PEA 工作流程有助于将灵敏度提高几个数量级，并在使用 IL-6、IL-8 时实现接近数字 ELISA 的检测限, 和 GM-CSF 作为验证。我们的 magPEA 为高灵敏度蛋白质检测提供了一种简单的方法，可以很容易地应用于其他实验室，从而最终加速未来对低丰度蛋白质生物标志物的研究。
京公网安备 11010802027423号