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超深度测序验证人类造血干细胞和祖细胞中 CRISPR/Cas9 基因组编辑的安全性

Nature Communications ( IF 14.7 ) Pub Date : 2022-08-11 , DOI: 10.1038/s41467-022-32233-z
M Kyle Cromer 1, 2 , Valentin V Barsan 2 , Erich Jaeger 3 , Mengchi Wang 3 , Jessica P Hampton 2 , Feng Chen 3 , Drew Kennedy 3 , Jenny Xiao 3 , Irina Khrebtukova 3 , Ana Granat 3 , Tiffany Truong 3 , Matthew H Porteus 2
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随着基于 CRISPR 的疗法进入临床,安全性评估仍然是一个关键且活跃的研究领域。在这里,我们采用临床下一代测序 (NGS) 工作流程来实现高测序深度并检测与癌症相关的基因外显子、所有外显子和全基因组的超低频变异。在以技术三次重复评估的三个独立的原代人类造血干细胞和祖细胞 (HSPC) 供体中,我们电穿孔针对三个基因座(AAVS1、 HBBZFPM2 )的高保真 Cas9 蛋白,并在第 4 天和第 10 天收获基因组 DNA。证明临床相关的高保真 Cas9 递送至原代 HSPC 和离体培养长达 10 天不会引入或富集致瘤变异,并且即使 gRNA 间隔序列中的单个 SNP 也足以消除 Cas9 脱靶活性具有修复能力的初级人类 HSPC。





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更新日期:2022-08-11
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