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CRISPR-Cas12a 核酸酶与结构工程化的 crRNA 一起发挥作用:合成 trAcrRNA
Scientific Reports ( IF 3.8 ) Pub Date : 2022-07-16 , DOI: 10.1038/s41598-022-15388-z D J Jedrzejczyk 1 , L D Poulsen 2 , M Mohr 1 , N D Damas 1 , S Schoffelen 1 , A Barghetti 2 , R Baumgartner 2 , B T Weinert 1 , T Warnecke 2 , R T Gill 1, 2
Affiliation
与 CRISPR-Cas9 系统相比,CRISPR-Cas12a 系统由于具有更广泛的编辑能力,正在成为一种有吸引力的细胞工程基因组编辑工具。与 Cas9 不同,Cas12a 核酸内切酶的特点是缺乏反式激活 crRNA (tracrRNA),这降低了编辑系统的复杂性,同时使 CRISPR RNA (crRNA) 工程成为进一步改善和调节基因编辑活性的有前途的方法。 CRISPR-Cas12a 系统。在这里,我们在体外和细胞内设计并验证了针对各种免疫相关位点的 16 种结构工程 Cas12a crRNA。我们证明,我们在环区域的所有结构修饰,从工程断裂 (STAR-crRNA) 到大间隙 (Gap-crRNA),以及核苷酸取代,都能够在各种 Cas12a 核酸酶存在的情况下实现基因切割。此外,我们观察到与野生型 crRNA 相比,使用工程化 crRNA 的短 HDR 模板的插入率相似,进一步证明在环区域引入的修饰导致了可比的基因组编辑效率。总之,我们表明 Cas12a 核酸酶可以广泛利用结构工程化的 crRNA,这些 crRNA 在原本高度保守的环区域中具有断裂或间隙,这可以进一步促进广泛的基因组编辑应用。
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