摘要 基于植物类黄酮的安全性和广泛可用性，已将其作为 β-冠状病毒复制的抑制剂和 COVID19 的潜在治疗剂进行了研究。SARS-CoV-2 病毒复制依赖于一种称为 3CL 蛋白酶或主蛋白酶 (Mpro) 的半胱氨酸蛋白酶，它将从 SARS-CoV-2 ssRNA 翻译的多蛋白切割成 11 种功能蛋白。该蛋白酶在 β-冠状病毒中高度保守，不耐受突变。SARS-CoV、SARS-CoV-2 和 MERS 的主要蛋白质 (Mpro) 已通过计算机和体外方法被鉴定为黄酮类化合物的靶标。我们之前已经表明，选择的类黄酮可抑制蛋白质二硫键异构酶 (PDI)，这对于正常血栓形成至关重要。这些类黄酮 PDI 抑制剂可在体内阻断血栓形成，并在临床研究中显示出作为抗血栓形成剂的功效。鉴于 COVID19 相关凝血病引起的大量发病率和死亡率，我们试图确定一种黄酮类化合物，它可以抑制 SARS-CoV-2 Mpro 和 PDI，从而可能阻断病毒复制和血栓形成。虽然在计算机研究中确定了许多类黄酮作为 SARS-CoV-2 主要蛋白 (Mpro) 抑制剂，但之前尚未对类黄酮针对 SARS-CoV-2 进行全面的体外测试。因此，我们使用高通量筛选评估了 1,020 种不同的黄酮类化合物在基于荧光的 Mpro 底物切割试验中抑制 SARS-CoV-2 Mpro 的能力。该分析确定了四种新的 Mpro 类黄酮抑制剂，其 IC 50 范围为 5-15 µM：amentoflavone, 3, 8'-biapigenin、jaceidin triacetate 和 pinocembrin 7-O-(3''-galloyl-4'',6''-(S)-hexahydroxydiphenoyl)-beta-D-glucose (PGHG)。这些化合物与之前鉴定的 SARS-CoV-2 Mpro、黄芩素和杨梅素的黄酮类抑制剂相同或更有效。结构活性关系将芹菜素鉴定为额外的 Mpro 抑制剂。在基于 Vero-E6 的 SARS-CoV-2 复制分析中，PGHG 的抑制 IC 50 = 4.9 µM。在 50 µM 时，芹菜素抑制 94±2.1%，黄芩素抑制 65±8.0%，而杨梅素、阿门黄酮和 3,8'-biapigenin 不抑制病毒复制。Jaceidin triacetate 毒性太大，无法进一步分析。我们接下来评估了新型 Mpro 抑制剂抑制 PDI 的能力。最有效的 PDI 抑制剂是 PGHG，在胰岛素比浊法中阻断 PDI 还原酶活性，IC 50 = 3.99±1.14 µM，在二-曙红-GSSG 试验中，IC 50 = 1.50±0.60 µM。当针对 PDI 的分离片段进行测试时，PGHG 抑制分离的 a 和 a' 片段以及 ab、b'xa' 和 abb'x 片段，表明它作用于 PDI 的 a 和 a' 结构域。由于 PDI 对血栓形成至关重要，我们评估了 PGHG 是否会阻止血管损伤后的血小板积累和纤维蛋白形成。我们给小鼠输注 25 mg/kg PGHG 或载体，随后通过激光诱导的提睾循环内小动脉损伤诱导血栓形成。PGHG 的输注导致 82±6.2% 的血小板积累抑制和 79±3.7% 的纤维蛋白形成抑制。相比之下，与载体对照相比，25 mg/kg 对小鼠尾部出血没有显着影响。靶向治疗仍然是抗击 COVID19 武器的重要组成部分。我们的研究结果表明，在 Penthorum chinense Pursh 中发现的一种天然类黄酮 PGHG 可抑制 SARS-CoV-2 复制和血栓形成，而不会增加出血。这一观察结果为开发用于抑制 β-冠状病毒的植物类黄酮疗法提供了原理证明，并支持进一步评估 PGHG 在 COVID19 中的治疗用途。图 1 图 1. 披露 无需声明相关的利益冲突。我们的研究结果表明，在 Penthorum chinense Pursh 中发现的一种天然类黄酮 PGHG 可抑制 SARS-CoV-2 复制和血栓形成，而不会增加出血。这一观察结果为开发用于抑制 β-冠状病毒的植物类黄酮疗法提供了原理证明，并支持进一步评估 PGHG 在 COVID19 中的治疗用途。图 1 图 1. 披露 无需声明相关的利益冲突。我们的研究结果表明，在 Penthorum chinense Pursh 中发现的一种天然类黄酮 PGHG 可抑制 SARS-CoV-2 复制和血栓形成，而不会增加出血。这一观察结果为开发用于抑制 β-冠状病毒的植物类黄酮疗法提供了原理证明，并支持进一步评估 PGHG 在 COVID19 中的治疗用途。图 1 图 1. 披露 无需声明相关的利益冲突。这一观察结果为开发用于抑制 β-冠状病毒的植物类黄酮疗法提供了原理证明，并支持进一步评估 PGHG 在 COVID19 中的治疗用途。图 1 图 1. 披露 无需声明相关的利益冲突。这一观察结果为开发用于抑制 β-冠状病毒的植物类黄酮疗法提供了原理证明，并支持进一步评估 PGHG 在 COVID19 中的治疗用途。图 1 图 1. 披露 无需声明相关的利益冲突。



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