最近，我们报道了一种基于氮杂大环 Cu 2+ 络合物化学的新型 H 2 S 荧光探针 HSip-1（J. Am. Chem. Soc., 133 (2011) 18003）（图 A）。HSip-1 可以选择性地检测水溶液中的 H 2 S，对生物硫醇、无机硫化合物、ROS 和 RNS 具有高选择性，并且在生物应用中具有优异的光物理性能（在不存在或存在 H 2 的情况下，Φ fl = 0.019 和 0.78 S，分别），源自其荧光素支架。我们还证实 HSip-1 可用于检测比色皿中的假酶 H 2 S 释放和由 3-巯基丙酮酸硫转移酶 (3MST) 或 3MST 表达细胞的裂解物和 3-巯基丙酮酸产生的 H 2 S，即, H 2 S 产生酶及其底物。所以，我们预计 HSip-1 不仅可用于荧光成像，还可用于 CBS（胱硫醚 β-合酶）、CSE（胱硫醚 γ-裂合酶）和 3MST 抑制剂的高通量筛选，这对于详细研究 a H 2 S 的广泛生物学功能。为了研究该探针是否可用于监测重组酶促 H 2 S 的产生，我们使用购自 Cayman 的重组人 CSE 和由大肠杆菌 BL21 菌株生产的 3MST 检测了其功效。表达带有 GST 标签的 3MST 的质粒 (3MST/pGEX)。在 30 mM HEPES 缓冲液（pH 7.4）中存在毫摩尔浓度的硫醇底物（半胱氨酸；2.5 mM）和磷酸吡哆醛（50 μM）时，很容易检测到 CSE（20 μg/mL）产生的 H 2 S。用 PAG（炔丙基甘氨酸；1 mM）预处理可抑制荧光增量，这是 CSE 的抑制剂（图 B）。此外，在 30 mM HEPES 缓冲液（pH 7.4）中存在硫醇底物（50 μM 3MP 和 40 μM DTT）时，也检测到 3MST（3.8 μg/mL）产生的 H 2 S（图 C）。我们进一步证实这些系统可应用于 384 孔板测定。通过利用 HSip-1 作为 H 2 S 的指标，我们随后对一个化学库进行了 3MST 抑制剂筛选，该化学库包含从东京大学药物发现开放创新中心获得的大约 150,000 种化合物。在本次会议中，我们将在海报中展示详细的协议和结果。在 30 mM HEPES 缓冲液（pH 7.4）中存在硫醇底物（50 μM 3MP 和 40 μM DTT）时，也检测到 8 μg/mL）（图 C）。我们进一步证实这些系统可应用于 384 孔板测定。通过利用 HSip-1 作为 H 2 S 的指标，我们随后对一个化学库进行了 3MST 抑制剂筛选，该化学库包含从东京大学药物发现开放创新中心获得的大约 150,000 种化合物。在本次会议中，我们将在海报中展示详细的协议和结果。在 30 mM HEPES 缓冲液（pH 7.4）中存在硫醇底物（50 μM 3MP 和 40 μM DTT）时，也检测到 8 μg/mL）（图 C）。我们进一步证实这些系统可应用于 384 孔板测定。通过利用 HSip-1 作为 H 2 S 的指标，我们随后对一个化学库进行了 3MST 抑制剂筛选，该化学库包含从东京大学药物发现开放创新中心获得的大约 150,000 种化合物。在本次会议中，我们将在海报中展示详细的协议和结果。从东京大学药物发现开放创新中心获得的 000 种化合物。在本次会议中，我们将在海报中展示详细的协议和结果。从东京大学药物发现开放创新中心获得的 000 种化合物。在本次会议中，我们将在海报中展示详细的协议和结果。



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